WESTERN及IP细胞裂解液(无抑制剂)
简介：
多种成分均可以从细胞中提取总蛋白，如Triton、SDS、NP-40等，Western 及IP细胞裂解液是采用一种非变性裂解方法来裂解细胞，并获得总蛋白的裂解液。所获得的蛋白质可以用于PAGE电泳，Western, 免疫沉淀(Immunol Precipitation， IP)和免疫共沉淀(co-IP)等，主要由Tris-HCl、NaCl、低浓度Triton X- 100，低浓度 sodium pyrophosphate 等组成，不含蛋白酶、磷酸酶抑制剂，并维持原有的蛋白间相互作用。用 Western及IP细胞裂解液(无抑制剂) (Cell lysis buffer for Western and IP without inhibitors) 得到的蛋白，可以用BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的TritonX-100等干扰物质，不宜用Bradford法测定由Western及IP细胞裂解液获得样本的蛋白浓度。
组成：
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产品名称
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PC011-100ml
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PC011-500ml
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Storage
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Western及IP细胞裂解液(无抑制剂)
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100ml
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500ml
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-20℃
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说明书
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一份
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保存条件：。
-20℃保存，一年有效。
操作步骤(仅供参考)：
(一)贴壁培养细胞
1、取Western及IP细胞裂解液室温溶解混匀，根据需要选择添加或不添加蛋白酶抑制剂。
2、去除贴壁细胞的培养液，用PBS、NS或无血清培养液清洗1次，低速离心，弃上清，留取沉淀。
3、按照6孔板每孔加入100~ 200L裂解液的比例，加入Western及IP细胞裂解液。移液器轻轻吹打，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液作用于细胞1~5s内，细胞就会被裂解。
4、10000~12000g，离心3~ 5min(如果用冷冻离心机4℃离心效果更佳)，取上清。
5、进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(二)悬浮培养细胞
1、取Western及IP细胞裂解液室温溶解混匀，根据籍要选择添加或不添加蛋白酶抑制剂。
2、低速离心悬浮细胞，弃上清，收集沉淀。
3、用手指轻弹细胞，使其松散。按照6孔板每孔细胞加入100~ 200L裂解液的比例，加入Western及IP细胞裂解液。通常6孔板每孔细胞加入100吨裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150~-200，再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。
4、10000~12000g， 4C离心3~5min (如无低温离心机，空温下离心亦可)，取上清。
5、进行后续的PAGE、 Western. 免疫沉淀等操作。
注意事项：
1、 去除贴壁细胞的培养液时，如果血清中的蛋白没有干扰，可以不用清洗。
2、 如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。
3、如果细胞量较多，必需分装成50～100万细胞/离心管，然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。
4、如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈Vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
5、 溶解CelllysisbufferforWesternandIP时，应尽量缩短溶解时间，避免裂解液中的有效成分失效。
6、 细胞裂解的操作步骤，应置于冰上或4℃进行。
7、本产品仅供科研使用，严禁它用。
