双缩脲法蛋白质含量测定试剂盒说明书
分光光度法 50T/48S
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定，确保蛋白浓度在1～10mg/ml范围内。
测定意义：
样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外，可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。
测定原理：
强碱性溶液中，双缩脲与CuSO4形成紫色络合物；紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。该方法测定范围为1~10mg蛋白质，适用于蛋白质浓度高的样品，尤其是动物材料
自备仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 ml玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
组成：
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产品名称
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PMD001-50T/48S
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Storage
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试剂一：液体
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50ml
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4℃
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标准品：液体
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1ml
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4℃
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说明书
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一份
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标准品：液体1ml×1瓶，5 mg/ml，4℃保存。
样品中可溶性蛋白质提取：
1. 液体样品：澄清无色液体样品可以直接测定。
2. 组织样品：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液（自备，根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水）冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清，即待测液。（动物样品常常需要稀释）
3. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1ml提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
测定步骤：
1. 分光光度计预热30 min，调节波长到540 nm，蒸馏水调零。
2. 空白管：取1 mL玻璃比色皿，加入200μl蒸馏水，1000μl试剂一，混匀后室温静置15 min，于540nm比色，记为A空白管。
3. 标准管：取1 mL玻璃比色皿，加入200μl标准液，1000μl试剂一，混匀后室温静置15 min，于540 nm比色，记为A标准管。
4. 测定管：取1 mL玻璃比色皿，加入200μl待测液，1000μl试剂一，混匀后室温静置15 min，于540nm比色，记为A测定管。
注意：空白管和标准管只需测定一次。
样品中蛋白质浓度计算公式
C待测（mg/mL）= C标准管×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)
=5×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)
注意事项：
1.样品蛋白浓度须在1~10mg/ml范围内，低于1mg/ml不能用此法，高于10mg/ml须做相应稀释。因此测定前用1~2个样做预实验，确保蛋白浓度在1~10mg/ml范围内。
2.待测样品蛋白提取可用生理盐水、双蒸水或不含蛋白的PBS提取。该法受硫酸铵、Tris缓冲液干扰，提取液中应不含这些物质；否则改用BCA蛋白质含量测定试剂盒。
