2×Taq Mix (+Dye)
REF: MP001
储运条件
长期保存请于-20℃保存，避免反复冻融。
产品组成
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组分/规格 |
MP001S |
MP001M |
MP001L |
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2×Taq Mix (+Dye) |
5×1 ml |
4×5×1 ml |
100×1 ml |
产品简介
2×Taq Mix (+Dye) 的浓度为2×，使用方便快捷，能减少 PCR 操作过程中的污染，使用时只需取适量2×Taq Mix (+Dye)，加入模板和引物，并加入ddH2O补足体积，使反应体系浓度为1× 即可进行 PCR 反应。
该Mix最长可扩增5 kb DNA片段，具有良好的扩增特异性和模板兼容性，PCR产物3' 端带A碱基，纯化后可直接用于T/A克隆。PCR Mix中包含两种染料，PCR产物无需添加Loading Buffer可直接点样电泳，且电泳过程中会出现两个指示条带。该染料不影响PCR扩增效率，但对于需要对PCR产物进行吸光度、荧光等光学分析的实验，建议在分析前对PCR产物进行纯化，或使用无染料的2×Taq Mix。
质量控制
核酸外切酶残留检测
将酶液与双链DNA底物在37℃温育16h，通过DNA电泳检测双链DNA底物无变化。
核酸内切酶残留检测
将酶液与超螺旋质粒DNA在37℃温育4h，通过DNA电泳检测质粒无变化
稳定性测试
室温存放一周，无明显活性改变。
功能检测
分别以质粒DNA、人基因组DNA和酵母菌液为模板，扩增1~5 kb 的3个片段, 30个循环后将PCR产物进行1%琼脂糖凝胶电泳，经核酸染料染色，可见目的条带。
使用方法
1. 常规PCR反应体系
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试剂 |
使用量 |
终浓度 |
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2×Taq Mix (+Dye) |
25 μl |
1× |
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正向引物(10 μM)a |
1~2 μl |
0.2~0.4 μM |
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反向引物(10 μM)a |
1~2 μl |
0.2~0.4 μM |
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DNA 模板b |
X μl |
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ddH2O |
To 50 μl |
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a.引物推荐终浓度为0.2~0.4 μM，效果不佳时可以在0.1~1 μM浓度范围内进行调整；
b.不同模板最佳反应浓度有所不同，以50 μl体系为例：模板为基因组DNA时，一般推荐的使用量为10~400 ng；当模板为质粒或病毒DNA时，一般推荐的使用量为10 pg~20 ng。
2. 常规PCR反应程序
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步骤 |
温度 |
时间 |
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预变性a |
94℃ |
3~5 min |
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变性 |
94℃ |
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退火 |
55~65℃ |
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延伸 b |
72℃ |
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终延伸 |
72℃ |
5 min |
a. 该预变性条件适合绝大多数扩增反应，对于一些复杂模板，例如：菌液、菌落（尤其是酵母）的PCR扩增，预变性时间可延长至10 min，以提高预变性效果；
b. 关于延伸速率，当目的片段长度不超过2 kb时，推荐使用30 sec/kb；当目的片段长度大于2 kb时，推荐使用60 sec/kb。
注：使用酵母菌液作为PCR扩增模板时，建议扩增的目的片段长度不超过2.5 kb，若超出2.5 kb，酵母菌液需要预先进行破壁处理。
3.凝胶浓度对应的染料迁移距离
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琼脂糖凝胶浓度 |
金色条带 |
蓝色条带 |
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0.8% |
~80 bp |
4000 bp |
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1.0% |
~40 bp |
2000 bp |
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1.5% |
~20 bp |
1500 bp |
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2.0% |
1200 bp |
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2.5% |
1200 bp |
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3.0% |
1200 bp |
注：染料会影响吸光
| 象形图 | |
|---|---|
| 警示语 | |
| Class | |
| 警告声明 | |
| UNub | |
| 危险声明 | |
| Packing Group |
| MP001 2X Taq mix （+Dye）说明书_00_1.png | 下载 |
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