单胺氧化酶（Monoamine Oxidase，MAO）试剂盒说明书
微量法100T/96S
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
MAO(EC1.4.3.4) 主要存在于脊椎动物的各种器官，特别是分泌腺、脑、肝脏，在无脊椎动物、豆类的芽等植物中也存在催化单胺类物质代谢，含量较低，具有重要的生理功能，其活性能反映肝纤维化的程度。此外，MAO活性异常导致细胞内单胺类神经递质运转出现紊乱，从而引发多种病症。
测定原理：
MAO催化单胺类底物脱氨生成相应的醛，进一步氧化成酸；底物在360nm处有特征吸收峰，测定360nm光吸收下降的速率，计算MAO活性。
试剂组成和配制：
|
产品名称 |
OT021-100T/96S |
Storage |
|
提取液：液体 |
100ml |
4℃ |
|
提取液：液体 |
100ml |
4℃ |
|
试剂一：液体 |
120ml |
4℃ |
|
试剂二：液体 |
2ml |
4℃避光 |
|
说明书 |
一份 |
|
需自备仪器和用品：
天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水。
粗酶液提取：
1、称取约0.1g样品，加1 ml预冷的提取液一充分冰浴匀浆，1000g，4℃，离心10min，弃沉淀；把上清转移到另一预冷的离心管，10000g，4℃，离心30min，弃上清；加入1ml预冷的提取液二，震荡混匀，16000g，4℃，离心40min，弃上清；沉淀加入预冷的1ml 试剂一，震荡混匀，即粗酶液（可用于可溶性蛋白浓度测定）。
2、细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1ml提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，弃沉淀；把上清转移到另一预冷的离心管，10000g，4℃，离心30min，弃上清；加入1.0 ml预冷的提取液二，震荡混匀，16000g，4℃，离心40min，弃上清；沉淀加入预冷的1.0 ml 试剂一，震荡混匀，即粗酶液（可用于可溶性蛋白浓度测定），取上清置于冰上待测。
3、血清：直接测定。
测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至360nm，蒸馏水调零。
2、操作表：
|
试剂名称(µl) |
对照管 |
测定管 |
|
酶液（µl） |
|
20 |
|
试剂一（µl） |
180 |
160 |
|
试剂二（µl） |
20 |
20 |
混匀，于微量石英比色皿/96孔板，对照管调零，测定360nm处吸光值A1，然后37℃水浴60min，对照管调零，测定360nm处吸光值A2。ΔA=A1-A2 注意：空白管只需测定一次。
MAO活性计算公式：
a．用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、按蛋白含量计算
酶活定义：37℃，pH7.6时，每毫克蛋白质1min内转化1 nmol底物的酶量为一个酶活单位。
DAO活性（nmol/min / mg prot）= 
×V反总÷（V样× Cpr）÷T= 114×ΔA÷Cpr
2、按样本质量计算：
酶活定义：37℃，pH7.6时，每克样品1min内转化1 nmol底物的酶量为一个酶活单位。
DAO活性（nmol/min / g 鲜重）=
×V反总÷（V样÷V样总×W）÷T = 114×ΔA÷ W
3、按照细胞数量计算
酶活定义：37℃，pH7.6时，每104个细胞1min内转化1 nmol底物的酶量为一个酶活单位。
DAO活性（nmol/min / 104 cell）= 
×V反总÷（V样÷V样总×细胞数量）÷T
= 114×ΔA÷细胞数量
4、按照液体体积计算
酶活定义：37℃，pH7.6时，每升血清1min内转化1 nmol底物的酶量为一个酶活单位。
DAO活性（nmol/min /L）=
×V反总÷V样=114×ΔA
ε：底物摩尔消光系数，1460L /mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应总体积，0.2ml；V样：反应中样本体积，0.02ml；V样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；T：反应时间，60min，W：样本质量，g
a．用96孔板测定的计算公式如下
1、按蛋白含量计算
酶活定义：37℃，pH7.6时，每毫克蛋白质1min内转化1 nmol底物的酶量为一个酶活单位。
DAO活性（nmol/min / mg prot）= 
×V反总÷（V样× Cpr）÷T= 228×ΔA÷Cpr
2、按样本质量计算：
酶活定义：37℃，pH7.6时，每克样品1min内转化1nmol底物的酶量为一个酶活单位。
DAO活性（nmol/min / g 鲜重）=
×V反总÷（V样÷V样总×W）÷T = 228×ΔA÷ W
3、按照细胞数量计算
酶活定义：37℃，pH7.6时，每104个细胞1min内转化1nmol底物的酶量为一个酶活单位。
DAO活性（nmol/min / 104 cell）= 
×V反总÷（V样÷V样总×细胞数量）÷T
= 228×ΔA÷细胞数量
4、 按照液体体积计算
酶活定义：37℃，pH7.6时，每升血清1min内转化1nmol底物的酶量为一个酶活单位。
DAO活性（nmol/min /L）=
×V反总÷V样=228000×ΔA
ε：底物摩尔消光系数，1460L /mol /cm； d：96孔板光径，0.5cm；V反总：反应总体积，0.2ml；V样：反应中样本体积，0.02ml；V样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；T：反应时间，60min，W：样本质量，g
注意事项：
吸光度变化应该控制在0.01～0.8之间。否则加大样品量或稀释样品，注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变。
| 象形图 | |
|---|---|
| 警示语 | |
| Class | |
| 警告声明 | |
| UNub | |
| 危险声明 | |
| Packing Group |
| OT021 单胺氧化酶（Monoamine Oxidase，MAO）检测试剂盒_微量法100T96S_.pdf | 下载 |
扫码关注