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脱氢酶(DHA)检测试剂盒(分光光度法 50T/48S)
OT022
Dehydrogenase (DHA) Activity Assay Kit (Spectrophotometry)
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OT022-50T/48S 50T/48S ¥680.00

脱氢酶(dehydrogenase, DHA)试剂盒说明书

                                                  分光光度法 50/48

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定                                             

测定意义:

脱氢酶(dehydrogenase, DHA) 是一类催化物质氧化还原反应的酶,催化底物通过细胞色素系统被氧化,释放的能量供机体使用,是生物体取得能量的一种方式。

测定原理:

在细胞呼吸过程中,氢受体2, 3, 5 - 氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC)在脱氢酶作用下接受氢以后,被还原为三苯基甲鐟(Triphenyl Formazone, TF),TF呈现红色,在波长485nm处有最大吸收峰,采用分光光度法于485nm测定其吸光值,即得脱氢酶活性。

试剂的组成和配制:

产品名称

OT022-50T/48S

Storage

提取液:液体

50ml

4℃

试剂一:粉剂

1

4℃避光

试剂二:液体

20ml

4

试剂三:甲醇

(自备)

--

说明书

一份

试剂一:粉剂×1瓶,使用前加10ml试剂二溶解,4℃避光保存(尽量现配现用)。

需自备仪器和用品:

筛子、天平、恒温培养箱或水浴锅、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、冰、蒸馏水、甲醇(不允许快递,请用户自备)。

样品处理:

1、细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500~10001的比例(建议500万细胞加入1ml提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。

2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液)进行冰浴匀浆,然后8000g4℃,离心20min

3、液体:直接检测。

测定步骤:

 

空白管

测定管

样品(μl

 

150

蒸馏水(μl

150

 

试剂一(μl

 

150

试剂二(μl

150

 

充分混匀,37℃培养24h

试剂三(μl

1350

1350

振荡1h8000g25℃,离心5min,取1ml上清于比色皿测定A485△A=A测定-A空白管。空白管只要做一管。

脱氢酶活力计算

标准曲线:y = 0.0422x - 0.0312R2 = 0.9988x为标准品浓度(μg/ml),y为吸光值。

1.按照蛋白浓度计算

酶活单位定义:在37℃时,每mg蛋白样品每min催化产生1μgTF为一个酶活性单位。

DHAμg/ min / mg prot=△A+0.0312÷ 0.0422×V反总÷Cpr×V样)÷T= 0.181×△A+0.0312÷Cpr

2.按照样本质量计算

酶活单位定义:在37℃时,每克样品每min催化产生1μgTF为一个酶活性单位。

DHAμg/ min /g 鲜重)=△A+0.0312÷ 0.0422×V反总÷W×V÷V样总)÷T= 0.181×△A+0.0312÷W

3. 按液体体积计算

酶活单位定义:在37℃时,每ml样本每min催化产生1μgTF为一个酶活性单位。

DHAμg/ min /ml=△A+0.0312÷ 0.0422×V反总÷V÷T= 0.181×△A+0.0312

V反总:反应总体积,1.65mlV样:加入反应体系中样本体积,0.15mlT:培养时间,1d=1440minW:样品质量,gCpr:蛋白浓度,mg/ml

注意事项:

配制好的试剂一避光保存于4℃,最好在一周内使用,若出现红色,则不能使用。

象形图
警示语
Class
警告声明
UNub
危险声明
Packing Group
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