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过氧化氢(H2O2)检测试剂盒(分光光度法50T/48S)
OX001
Hydrogen Peroxide Content Assay Kit (Spectrophotometry)
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OX001-50T/48S 50T/48S ¥200.00
OX001-100T/96S 100T/96S ¥380.00

 

过氧化氢含量H2O2试剂盒说明书

                                                  分光光度法 50/48

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定                                             

测定意义:

H2O2是生物体内最常见的活性氧分子,主要由SODXOD催化产生,由CATPOD催化降解。H2O2不仅是重要的活性氧之一,也是活性氧相互转化的枢纽。一方面,H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸,蛋白质等生物大分子,并使细胞膜遭受损害,从而加速细胞的衰老和解体;另一方面H2O2是许多氧化应急反应中的关键调节因子。

测定原理:

H2O2与硫酸钛生成黄色的过氧化钛复合物,在415nm有特征吸收

试剂的组成和配制

产品名称

OX001-50T/48S

Storage

试剂一:丙酮

60ml(自备)

4

试剂二:粉剂

1

4

试剂:液体

15ml

4

试剂:液体

60ml

4

说明书

一份

试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入10ml浓盐酸充分溶解备用。用不完的试剂4℃保存;(溶解时间较长,约30min,可40-60℃加热溶解,务必提前准备)

自备仪器和用品:

可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 ml玻璃比色皿、丙酮60ml、浓盐酸10ml研钵

H2O2提取

1、细菌细胞样品的制备:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清按照细菌或细胞数量(104个):试剂一体积(ml)为500~10001的比例(建议500万细菌或细胞加入1ml试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);用试剂一定容至1ml8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2 组织样品的制备:按照组织质量(g:试剂一体积(ml)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml试剂一)进行冰浴匀浆;转移至EP管中,用试剂一定容至1ml8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

3、血清(浆)样品:直接检测

测定步骤:

1、分光光度计预热30min以上,调节波长至415nm,蒸馏水调零。

2、将试剂二、三和四37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴10min以上。

3EP管中按顺序加入下列试剂

试剂名称(μl

测定

对照

样本

吸取的量的为全部上清液

 

试剂一

 

1000

试剂二

100

100

试剂三

200

200

4000g25离心10min,弃上清,留沉淀

试剂四

1000

1000

加入试剂四溶解沉淀后,室温静置5min,倒入比色皿中测定415nm处吸光值A。对照管只要做一次即可。计算ΔAA测定-A对照。

注意事项:

1由于试剂一易挥发,试剂一必须先预冷再加,研磨时必须在冰上研磨。

2本试剂盒中试剂的挥发性较高,请带一次性手套和口罩。

H2O2含量计算

1、标准条件下测定的回归曲线,y = 0.7488x + 0.0006 (x标准品浓度μmol/mlyΔA)

2、血清(浆)H2O2含量的计算:

H2O2含量μmol/mlA-0.0006) ÷0.7488=1.34×(ΔA-0.0006)

3细菌、细胞或组织中H2O2含量计算

1)按照蛋白浓度计算

H2O2含量(μmol/mg prot)= [ (ΔA-0.0006) ÷0.7488×V1]÷(V1×Cpr)= 1.34×(ΔA-0.0006)÷Cpr

需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。

2)按照样质量计算

H2O2含量(μmol/g鲜重)= [ (ΔA-0.0006) ÷0.7488×V1]÷(W ×V1÷V2)= 1.34×(ΔA-0.0006W

 (3 ) 按照细菌或细胞密度计算:

H2O2含量(μmol/104)= [ (ΔA-0.0006) ÷0.7488×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0027×(ΔA-0.0006)

V1:加入反应体系中样本体积,1mlV2:加入提取液体积,1mlCpr:样本蛋白质浓度,mg/mlW:样质量,g500:细胞或细菌总数,500万。

注意:标曲线性范围为0.1μmol/ml2μmol/ml,吸光度ΔA线性范围为0.07-1.5ΔA超过1.5则需要稀释,计算公式乘以相应稀释倍数。

象形图
警示语
Class
警告声明
UNub
危险声明
Packing Group
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