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超氧阴离子(OFR)检测试剂盒(分光光度法50T/48S)
OX021
Superoxide Anion Content Assay Kit (Spectrophotometry)
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OX021-50T/48S 50T/48S ¥520.00
OX021-100T/96S 100T/96S ¥980.00

超氧阴离子(Oxygen free radical, OFR)试剂盒说明书

                                                  分光光度法50/48

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定                                             

测定意义:

生物体内超氧阴离子等活性氧具有免疫和信号传导的作用,但积累过多时会对细胞膜及生物大分子产生破坏作用,导致机体细胞和组织代谢异常,从而引起多种疾病。

测定原理:

超氧阴离子与盐酸羟胺反应生成NO2NO2在对氨基苯磺酸和α-萘胺的作用下,生成红色的偶氮化合物,在530nm处有特征吸收峰,根据ΔA值可以计算样品中O2含量,反应式为NH2OH + 2O2 H → NO2  H2O2 H2O

试剂组成和配制:

产品名称

OX021-50T/48S

Storage

提取液:液体

100ml

4℃

试剂一:液体

25ml

4℃

试剂二:液体

20ml

4℃避光

试剂三:液体

20ml

4℃避光

试剂:氯仿

(自备)

--

说明书

一份

自备仪器和用品:

天平、水浴锅、离心机、可见分光光度计、1 ml玻璃比色皿、氯仿和蒸馏水

超氧阴离子提取:

1、植物、动物组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液)进行冰浴匀浆,然后10000g4℃,离心20min,取上清置于冰上待测。。

2、细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500~10001的比例(建议500万细胞加入1ml提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000g4℃,离心20min,取上清置于冰上待测。

3、血清或培养液:直接测定。

测定步骤:

 

空白管

测定管

样本μl

 

500

提取液μl

500

 

试剂一μl

400

400

混匀,37℃水浴20min

试剂二μl

300

300

试剂三μl

300

300

混匀,37℃水浴20min

试剂四μl

500

500

混匀,8000g25℃,离心5min,小心吸取上层水相1ml1ml玻璃比色皿,蒸馏水调零,测定A530ΔA=A测定-A空白,空白管只要做一管。

超氧阴离子含量计算公式

标准曲线:y = 0.0242x - 0.0027R2=0.9980

1. 组织:

1)按照样本质量计算

超氧阴离子含量(nmol/g 鲜重)= (ΔA +0.0027)÷0.0242×V反总÷(V÷V样总×W)×2

                             =148.76×(ΔA +0.0027)÷W

超氧阴离子产生速率(nmol/ g·min=148.76×(ΔA+0.0027)÷W÷T

                                =7.44× (ΔA +0.0027)÷W

2)按照蛋白质浓度计算

超氧阴离子含量(nmol/mg prot= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V反总÷(V×Cpr)×2

                                             =148.76×(ΔA+0.0027)÷Cpr

超氧阴离子产生速率(nmol/ mg prot·min= 148.76×(ΔA+0.0027)÷Cpr÷T

                                      =7.44× (ΔA+0.0027)÷Cpr

2. 细菌,真菌:

超氧阴离子含量(nmol/104 cell= (ΔA+0.0027)÷0.0242× V反总÷(V÷V样总×细胞数量)×2

= 148.76×(ΔA+0.0027)÷细胞数量

超氧阴离子产生速率(nmol/104 cell·min= 148.76×(ΔA+0.0027)÷细胞数量÷T

=7.44× (ΔA+0.0027)÷细胞数量

3. 血清或培养液

超氧阴离子 含量(nmol/ml= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V反总÷V×2

=148.76× (ΔA+0.0027)

超氧阴离子产生速率(nmol/ml·min= 148.76× (ΔA+0.0027) ÷T

= 7.44× (ΔA+0.0027)

V样总:加入提取液体积,1 mlV反总:反应总体积,0.9mlV样:反应中样品体积,0.5mlCpr:样本蛋白质浓度,mg/mlW:样品质量,gT:反应时间,20min22分子O2参与反应生成1分子NO2

注意事项

1、吸光值大于2,样品适当稀释再测定,注意计算公式里乘以稀释倍数。

2、样品制备好之后,立刻进行测定,请勿将样品进行长时间的低温保存,以免影响测定结果。

3、试剂四有一定的毒性,请操作时做好防护措施。

 

象形图
警示语
Class
警告声明
UNub
危险声明
Packing Group
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