H2S含量测定试剂盒说明书
分光光度法 50管/48样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
H2S是一种新型气态信号分子,存在于脑内的神经递质,生理浓度的H2S对神经系统海马的长时程增强功能具有重要的调节作用,并对自发性高血压、出血性休克及肝硬化等疾病的过程发挥着重要的病理生理效应。
测定原理:
H2S与醋酸锌、N, N-二甲基对苯二胺和硫酸铁铵等反应生成亚甲基蓝,亚甲基蓝在665nm处有最大吸收峰,通过测定其吸光值可计算H2S含量。
组成:
产品名称
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SG001-50T/48S
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Storage
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提取液:液体
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50ml
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4℃
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试剂一:液体
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50ml
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4℃
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试剂二:液体
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32ml
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4℃
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试剂三:液体
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16ml
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4℃避光
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试剂四:液体
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16ml
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4℃
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试剂五:液体
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2.5ml
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4℃避光
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说明书
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一份
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试剂三:液体16ml×1瓶,4℃避光保存。
试剂五:液体2.5ml×1瓶,4℃避光保存。
自备仪器和用品:
天平、低温离心机、可见分光光度计、1 ml玻璃比色皿、蒸馏水。
样品处理:
1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液)进行冰浴匀浆,然后10000g,4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1ml提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。
3. 血清(浆):直接测定
操作表(取2 ml离心管,按照下表操作):
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空白管
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测定管
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样品(μl)
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600
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H2O(μl)
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600
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试剂一(μl)
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600
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600
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充分震荡混匀
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试剂二(μl)
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600
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600
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10000g,4℃,离心10min,去上清,留沉淀
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H2O(μl)
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600
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600
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10000g,4℃,离心10min,去上清,留沉淀
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试剂一(μl)
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300
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300
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试剂三(μl)
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300
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300
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充分震荡混匀
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试剂四(μl)
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300
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300
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10000g,4℃,离心10min,取800μl上清加入1ml玻璃比色皿
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试剂五(μl)
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40
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40
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混匀,25℃静置5min,测定665nm吸光值,记为A测定和A空白,ΔA=A测定-A空白。
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H2S计算公式:
标准曲线回归方程为:y = 0.0044x,R2 = 0.9988
(1)组织样品
a.按照蛋白浓度计算
H2S(nmol/mg prot)=×V反总÷(V样×Cpr)=340.9×ΔA÷Cpr
b.按照样本重量计算
H2S(nmol/g鲜重)=×V反总÷(V样÷V样总×W)= 340.9×ΔA÷W
(2)液体样品
H2S(nmol/ml)=×V反总÷V样= 340.9×ΔA
(3) 细胞
H2S(nmol/104 cell)=×V反总÷(V样÷V样总×细胞数量(万个))=340.9×ΔA÷细胞数量(万个)
V反总:反应总体积,0.9ml;V样:反应中样品体积,0.6ml;V样总:加入提取液体积,1ml;W:样品质量,g;Cpr:蛋白浓度,mg/ml
注意事项:
最低检出限为1nmol/ml。