维生素E(Vitamin E,VE)试剂盒说明书
分光光度法 50管/24样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
维生素E(Vitamin E)是一种脂溶性维生素,其水解产物为生育酚,是生物体中最主要的抗氧化剂之一,能阻止不饱和脂肪酸收到过氧化作用的损伤,维持不饱和脂肪酸细胞膜的完整性和正常功能,具有延缓衰老、预防溶血性贫血作用,在医药、化妆品、保健品、食品行业具有较高的应用价值。
测定原理:
VE还原Fe3+为Fe2+,Fe2+与1,10-菲罗啉产生有色络合物,在530nm有特征吸收峰。
组成:
产品名称
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VS005-50T/24S
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Storage
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提取液:液体
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100ml
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4℃
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试剂一:液体
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5ml
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4℃避光
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试剂二:液体
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5ml
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4℃
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试剂三:液体
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5ml
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4℃
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试剂四:液体
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15ml
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4℃
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说明书
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一份
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试剂三:粉剂×1 瓶,-20 ℃保存,用时加入 4ml 蒸馏水,混匀,用不完的试剂 4℃保存一周;
试剂四:粉剂×1 瓶,4 ℃保存,用时加入 4ml 蒸馏水,混匀,用不完的试剂 4℃保存一周;
自备仪器和用品:
天平、研钵、离心机、可见分光光度计、1 ml玻璃比色皿、漩涡震荡仪。
样本处理:
1. 组织:按照质量(g):提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.2g,加入1ml提取液)加入提取液,充分匀浆后用提取液定至2ml,在漩涡混匀仪上震荡5min,于25℃,5000g离心10min,取上层测定。
2. 细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500~1000:1的比例(建议1000万细胞加入2ml提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);在漩涡混匀仪上震荡5min,于25℃,5000g离心10min,取上层测定。
3. 血清:取0.1ml,加1.9ml提取液,漩涡仪混匀上震荡5min,于25℃,5000g离心10min,取上层测定。
测定操作:
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对照管
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测定管
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样品(μl)
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500
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500
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试剂一(μl)
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100
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100
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试剂二(μl)
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100
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试剂三(μl)
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100
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充分混匀,25℃反应5min
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试剂四(μl)
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300
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300
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充分混匀,于1ml玻璃比色皿,无水乙醇调零,测定530nm处吸光值,记为A对照管和A测定管,△A=A测定管-A对照管。
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计算公式:
标准曲线:y = 0.22x + 0.0065, R2 = 0.9978
1. 按照蛋白含量计算
VE含量(μg/mg prot)=(△A -0.0065)÷ 0.22×V反总÷(V样×Cpr)
= 9.09×(△A -0.0065)÷ Cpr
2. 按照样本质量计算
VE含量(μg/g)=(△A -0.0065)÷ 0.22×V反总÷(V样×W÷V样总)
= 18.18×(△A -0.0065)÷ W
3. 按照细胞数量计算
VE含量(μg/104 cell)=(△A -0.0065)÷ 0.22×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总)
= 18.18×(△A -0.0065)÷ 细胞数量
4. 按照液体体积计算
VE含量(μg/ml)=(△A -0.0065)÷ 0.22×V反总÷V样×20
= 181.82×(△A -0.0065)
V反总:反应总体积,1ml;:V样:加入样本体积,0.5ml;V样总:加入提取液体积,2ml; Cpr:蛋白浓度,mg/ml;W:样本质量,g
注意事项:
1. 若反应体系产生沉淀,需要将样品进行适当的稀释,并在计算公式中乘以稀释倍数。
2. 最低检出限为1μg/g。