蔗糖磷酸化酶（Sucrose Phosphorylase, SP）试剂盒说明书
分光光度法50管/48样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
SP(EC2.4.1.7)主要存在于微生物和植物中，裂解葡萄糖苷键，催化葡萄糖基转移到果糖、木糖、半乳糖和鼠李糖等，合成相应的葡萄糖基低聚糖。此外，SP还能催化氢醌合成熊果苷，具有极强的美白效果，在化妆品工业中具有重要应用。
测定原理：
SP能够以磷酸为受体，催化蔗糖产生1-磷酸葡萄糖，在葡萄糖磷酸变位酶催化下变位为6-磷酸葡萄糖，在6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下还原NADP+生成NADPH，导致340nm光吸收值增加。测定340nm吸光度增加速率，即可计算SP活性。
组成：
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产品名称 |
AE017-50T/48S |
Storage |
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提取液：液体 |
50ml |
4℃ |
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试剂一：液体 |
35ml |
4℃ |
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试剂二：粉剂 |
1瓶 |
-20℃避光 |
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试剂三：粉剂 |
1瓶 |
-20℃避光 |
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说明书 |
一份 |
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试剂二：粉剂×1瓶，-20℃避光保存，临用前加6ml蒸馏水溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂三：粉剂×1瓶，-20℃避光保存，临用前加12ml蒸馏水水溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
自备仪器和用品：
天平、低温离心机、恒温水浴锅、紫外分光光度计、1 ml石英比色皿和蒸馏水。
粗酶液提取：
1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃，离心10min，取上清待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1ml提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
测定步骤：
1.分光光度计预热30min，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2.操作表
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试剂名称 |
对照管 |
测定管 |
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试剂一（μl） |
600 |
600 |
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试剂二（μl） |
100 |
100 |
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试剂三（μl） |
200 |
200 |
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样本（μl） |
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100 |
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蒸馏水（μl） |
100 |
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迅速混匀，于1ml石英比色皿，37℃下测定340nm的初始吸光值与反应2min后的吸光值，测定管记作A1与A2，对照管记作A3与A4，△A=（A2- A1）-（A4- A3）。 |
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SP活性计算公式:
1. 按照蛋白浓度计算
酶活定义：37℃，pH6.8时，每毫克蛋白质每分钟催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。
SP活性（nmol/min/mg prot）=
×V反总÷V样÷Cpr÷T=804×△A÷Cpr
2. 按照样本质量计算
酶活定义：37℃，pH6.8时，每克样本每分钟催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。
SP活性（nmol/min/g 鲜重）=
×V反总÷(V样÷V样总×W)÷T=804×△A÷W
3. 按照细胞数量计算
酶活定义：37℃，pH6.8时，每104个细胞每分钟催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。
SP活性（nmol/min/104 cell）=
×V反总÷(V样÷V样总×细胞数量（万个）)÷T=804×△A÷细胞数量（万个）
：NADPH摩尔消光系数，6220 L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应体系总体积，1ml；V样：反应体系中样本体积，0.1ml；W：样本质量，g；Cpr：蛋白浓度，mg/ml；V样总：加入提取液体积，1ml；T：反应时间，2min
注意事项:
1. 可选用BCA法测定蛋白含量试剂盒测定蛋白含量。
2. 样本较多时，可以按照每个样本试剂一：试剂二：试剂三=600：100：200（μl）的比例配制工作液，用多少配多少，临用前立刻配制，10分钟内使用。
| 象形图 | |
|---|---|
| 警示语 | |
| Class | |
| 警告声明 | |
| UNub | |
| 危险声明 | |
| Packing Group |
| AE017 蔗糖磷酸化酶（SP）检测试剂盒_分光光度法50T48S_.pdf | 下载 |
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