羧酸酯酶（carboxylesterase，CarE）活性测定试剂盒说明书
分光光度法 50管/48样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
哺乳动物CarE，也称脂族酯酶（aliesterase），广泛分布于组织和器官，属于丝氨酸水解酶家族。CarE催化含酯键、酰胺键和硫酯键的内源性与外源性物质水解，但不能催化水解乙酰胆碱及其类似物。CarE参与脂质运输和代谢，并且与多种药物、环境毒物以及致癌物的解毒和代谢有关，有机磷农药可结合并且抑制CarE活性。
测定原理：
CarE能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯，固蓝显色；在450 nm光吸收增加速率，计算CarE活性。
组成：
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产品名称
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ES003-50T/48S
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Storage
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试剂一：液体
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50ml
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4℃
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试剂二：液体
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30ml×2
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4℃
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试剂三：粉剂
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2支
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4℃
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试剂四：粉剂
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2支
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-20℃
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说明书
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一份
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试剂三：粉剂×2支， 4℃保存，临用前取1支试剂三，加1.2ml无水乙醇充分溶解；
试剂四：粉剂×2支，-20℃保存，临用前取1支试剂四，加少量试剂二溶解；
工作液配制：临用前配制，向1瓶试剂二中，加入溶解后的试剂三和试剂四各1支，充分溶解，过滤，4℃避光保存，可用1周。
自备仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 ml玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
样本的前处理：
1、细菌、细胞样品制备
收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每200万细菌或细胞加入400μl试剂一，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3s，间隔10s，重复30次）；12000g 4℃离心30min，取上清液待测。
2、组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml试剂一）进行冰浴匀浆；12000g 4℃离心30min，取上清液待测。
3、液体：直接测定。
测定步骤：
1. 分光光度计预热30min，调节波长到450 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂二置于37℃水浴中预热30 min。
3. 空白管：取1ml玻璃比色皿，依次加入5μl蒸馏水和1000μl试剂二，迅速混匀，于450nm处测定3min内吸光值变化，第10s吸光值记为A1，第190s吸光值记为A2。△A空白管=A2-A1
4. 测定管：取1ml玻璃比色皿，依次加入5μl上清液和1000μl试剂二，迅速混匀，于450nm处测定3min内吸光值变化，第10s吸光值记为A3，第190s吸光值记为A4。△A测定管=A4-A3
注意：空白管只需测定一次。
CarE活性计算公式：
1、 组织中CarE活性
（1） 按照蛋白浓度计算
单位的定义：每mg组织蛋白在37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为1个酶活单位。
CarE酶活(U/mg prot)= (△A测定管-△A空白管) ×V反总÷(Cpr×V样)÷T
= 67×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr
Cpr：蛋白质浓度，mg/ml；V样：加入上清液体积，0.005 ml；T：反应时间，3min。V反总：1.005ml；蛋白质浓度需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。
（2） 按照样品质量计算
单位的定义：每g组织在37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为1个酶活单位。
CarE酶活(U/g 鲜重)= (△A测定管-△A空白管) ×V反总×（V样总÷V样）÷W÷T
= 67×(△A测定管-△A空白管)÷W
V样总：上清液总体积，1 ml；V样：加入上清液体积(ml)，0.005 ml；V反总：1.005ml；W：样品质量（g）；T：反应时间（min），3min。
2、 细菌或细胞中CarE活性
单位的定义：每1万个细菌或细胞在37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为1个酶活单位。
CarE酶活(U/104 cell)= (△A测定管-△A空白管) ×V反总×（V样总÷V样）÷细胞密度（104 cell/ml）÷T
= 67×(△A测定管-△A空白管)÷细胞密度（104 cell/ml）
V总：上清液总体积，1 ml；V样：加入上清液体积(ml)，0.005 ml；V反总：1.005ml ；T：反应时间（min），3min。
3、 液体中CarE活性
单位的定义：每毫升样品在37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为1个酶活单位。
CarE酶活(U/ml )= (△A测定管-△A空白管) ×V反总÷V样÷T
= 67×(△A测定管-△A空白管)
V样总：上清液总体积，1 ml；V样：加入上清液体积(ml)，0.005 ml；V反总：1.005ml；T：反应时间（min），3min。
