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羧酸酯酶(CarE)检测试剂盒(微量法 100T/96S)
ES004
Carboxylesterase (CarE) Activity Assay Kit (Microassay)
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ES004-100T/96S 100T/96S ¥630.00

羧酸酯酶(CarE)活性测定试剂盒说明书

                                                  微量法 100T/96S

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定                                             

测定意义:

哺乳动物CarE,也称脂族酯酶(aliesterase),广泛分布于组织和器官,属于丝氨酸水解酶家族。CarE催化含酯键、酰胺键和硫酯键的内源性与外源性物质水解,但不能催化水解乙酰胆碱及其类似物CarE参与脂质运输和代谢,并且与多种药物、环境毒物以及致癌物的解毒和代谢有关,有机磷农药可结合并且抑制CarE活性。

测定原理:

CarE能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯,固篮显色;在450 nm光吸收增加速率,计算CarE活性。

组成:

产品名称

ES004-100T/96S

Storage

试剂一:液体

1

4℃

试剂二:液体

15ml×2

4℃

试剂三:粉剂

2

4℃

试剂:粉剂

2

-20℃

说明书

一份

 

试剂三:粉剂×2支, 4℃保存,临用前取1支试剂三,加0.6ml无水乙醇充分溶解;

试剂四:粉剂×2支,-20℃保存,临用前取1支试剂四,加少量试剂二溶解;

工作液配制:临用前配制,向1瓶试剂二中,加入溶解后的试剂三和试剂四各1支,充分溶解,过滤,4℃避光保存,可用1周。

自备仪器和用品:

可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 ml玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

粗酶液提取:

细菌、细胞样品制备

收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每200万细菌或细胞加入400μl试剂一,超声波破碎细菌或细胞(功率20%,超声3s,间隔10s,重复30次);12000g 4℃离心30min,取上清液待测。

2、组织:按照组织质量(g):试剂一体积(ml)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml试剂一)进行冰浴匀浆;12000g 4℃离心30min,取上清液待测。

3、液体:直接测定

测定操作:

1. 分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长到450 nm,蒸馏水调零。

2. 试剂二置于37℃水浴中预热30 min

3. 空白管:取微量玻璃比色皿/96孔板,依次加入5μl蒸馏水和200μl试剂二,迅速混匀,于450nm处测定3min内吸光值变化,第10s吸光值记为A1,第190s吸光值记为A2△A空白管=A2-A1

4. 测定管:取微量玻璃比色皿/96孔板,依次加入5μl上清液和200μl试剂二,迅速混匀,于450nm处测定3min内吸光值变化,第10s吸光值记为A3,第190s吸光值记为A4△A测定管=A4-A3

注意:空白管只需测定一次。

CarE活性计算公式:

a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1组织中CarE活性

(1) 按蛋白浓度计算

CarE活性单位定义:mg组织蛋白在37反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为1个酶活单位。

 

CarE酶活(U/mg prot)= (△A测定管-△A空白管) ×V反总÷(Cpr×V)÷T

= 13.67×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr

(2) 按样本鲜重计算

CarE活性单位定义:g组织在37反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为1个酶活单位。

CarE酶活(U/g 鲜重)= (△A测定管-△A空白管) ×V反总×V样总÷V样)÷W÷T

=13.67×(△A测定管-△A空白管)÷W

2细菌或细胞中CarE活性

CarE活性单位定义:1万个细菌或细胞在37反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为一个CarE活性单位。

CarE酶活(U/104 cell)= (△A测定管-△A空白管) ×V反总×V样总÷V样)÷细胞密度(104 cell/ml÷T=13.67×(△A测定管-△A空白管细胞密度(104 cell/ml

3液体中CarE活性

CarE活性单位定义:每毫升样品在37反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为1个酶活单位。

CarE酶活(U/ml )= (△A测定管-△A空白管) ×V反总÷V÷T

=13.67×(△A测定管-△A空白管)

V反总:反应体系总体积,205μl=2.05×10-4LV样总:上清液总体积,1 mlV样:加入上清液体积(ml)0.005 mlCpr:蛋白质浓度,mg/mlW:样品质量(g);T:反应时间(min),3min

b. 使用96孔板测定的计算公式如下

1组织中CarE活性

(3) 按蛋白浓度计算

CarE活性单位定义:mg组织蛋白在37反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为1个酶活单位。

 

CarE酶活(U/mg prot)= (△A测定管-△A空白管) ×V反总÷(Cpr×V)÷T

= 13.67×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr

(4) 按样本鲜重计算

CarE活性单位定义:g组织在37反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为1个酶活单位。

CarE酶活(U/g 鲜重)= (△A测定管-△A空白管) ×V反总×V样总÷V样)÷W÷T

=13.67×(△A测定管-△A空白管)÷W

2细菌或细胞中CarE活性

CarE活性单位定义:1万个细菌或细胞在37反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为一个CarE活性单位。

CarE酶活(U/104 cell)= (△A测定管-△A空白管) ×V反总×V样总÷V样)÷细胞密度(104 cell/ml÷T=13.67×(△A测定管-△A空白管细胞密度(104 cell/ml

3. 液体中CarE活性

CarE活性单位定义:每毫升样品在37反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为1个酶活单位。

CarE酶活(U/ml )= (△A测定管-△A空白管) ×V反总÷V÷T

=13.67×(△A测定管-△A空白管)

V反总:反应体系总体积,205μl=2.05×10-4LV样总:上清液总体积,1 mlV样:加入上清液体积(ml)0.005 mlCpr:蛋白质浓度,mg/mlW:样品质量(g);T:反应时间(min),3min

象形图
警示语
Class
警告声明
UNub
危险声明
Packing Group
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