酸性磷酸酶（ACP）活性测定试剂盒说明书
微量法 100T/48S
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
ACP在酸性条件下催化磷酸单酯水解称无机磷酸，常见于巨噬细胞的溶酶体内。ACP常用于前列腺癌的辅助诊断。
测定原理：
在酸性环境中，ACP催化对硝基苯磷酸二钠水解生成4-硝基苯酚，在405nm有特征光吸收；通过测定405nm吸光度增加速率，来计算ACP活性。
组成：
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产品名称
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ES006-100T/48S
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Storage
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试剂一：液体
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60ml×2
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4℃
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试剂二：液体
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50ml
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4℃
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试剂三：液体
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50ml
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4℃
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说明书
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一份
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自备仪器和用品：
酶标仪、96孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器和蒸馏水。
粗酶液提取：
1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml试剂一）进行冰浴匀浆，4℃、10000g离心10 min，取上清液待测。
2. 细菌或细胞：按照细菌或细胞数量（104个）：试剂一体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1ml试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3 min）；然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3. 血液可直接测定，或者适当稀释后测定。
测定：
1. 酶标仪预热30 min，调节波长到405 nm。
2. 在 EP 管中加入下列试剂
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试剂名称（μL）
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测定管
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对照管
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样本
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10
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10
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试剂一
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90
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990
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试剂二
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900
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30℃避光保温30 min
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试剂三
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400
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400
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混匀，吸取 200µL 加入96 孔板中，405 nm 下测定各管吸光值。ΔA=A测定管-A对照管。
注意：每个测定管需做一个对照管。
ACP活性计算：
标准曲线 y = 7.3336x + 0.0179；R2 = 0.9996；x为标准品浓度（μmol/ml），y为吸光值ΔA。
1. 血液中ACP活性计算
活性单位定义：30℃中每毫升血液每分钟催化产生1μmol 4-硝基苯酚定义为1个酶活单位。
ACP活力(μmol/min/ml)=（ΔA-0.0179）÷7.3336 ×V反总÷T÷V样
= 0.4545 ×（ΔA-0.0179）
2. 组织、细菌或细胞中ACP活性计算
（1）按照蛋白浓度计算
活性单位定义：30℃中每毫克蛋白每分钟催化产生1 μmol 4-硝基苯酚定义为1个酶活单位。
ACP活力(μmol/min/mg prot)= (ΔA-0.0179)÷7.3336 ×V反总÷T÷(V样×Cpr)
=0.4545 ×（ΔA-0.0179）÷Cpr
（2）按照样本质量计算
活性单位定义：30℃中每克组织每分钟催化产生1 μ mol 4-硝基苯酚定义为1个酶活单位。
ACP活力 (μmol/min/g 鲜重)=(ΔA-0.0179)÷7.3336 ×V反总÷T÷(W×V 样÷V 样总)
= 0.4545 ×（ΔA-0.0179）÷W
（3）按照细菌或细胞数量计算
活性单位定义：30℃中每104个细菌或细胞每分钟催化产生1 μ mol 4-硝基苯酚定义为1个酶活单位。
ACP 活力(μmol/min/104 cell)=(ΔA-0.0179)÷7.3336 ×V反总÷T÷（细胞数量×V 样÷V 样总）
= 0.4545 ×（ΔA-0.0179）÷细胞数量
V反总：反应体系总体积（ml），1ml； W ：样品质量，g； V样：加入反应体系中样本体积（ml），0.01ml；V样总：提取液体积，1ml；T：反应时间（min），30 min；500：细胞或细菌总数，500万。
注意事项：
ACP不稳定，尤其在37℃和pH大于7的条件下活力丧失快，因此酸性磷酸酶样品一般需当天准备；血清样品中，每毫升血清中加入10mg柠檬酸氢二钠或者5mg硫酸氢钠，使pH降至6.5以下，或5ml血清加入30%醋酸溶液2～3滴，置于4℃可保存1周。
