氧化型谷胱甘肽含量测定试剂盒说明书
微量法 100T/96S
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
GSH/GSSG 是细胞内最重要的氧化还原对之一。因此，测定细胞内 GSH 和 GSSG 含量以及 GSH/GSSG
比值，能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态，也是谷胱甘肽氧化还原循环的主要指标之一。
测定原理：
利用 2-VP 法测 GSSG 含量。
组成：
产品名称
GSH004-100T/96S
Storage
试剂一：液体
100ml
4℃
试剂二：液体
600μl
4℃
试剂三：液体
50ml
4℃
试剂四：液体
2.5ml
4℃
试剂五：液体
15μl
-20℃
试剂六：粉剂
1 瓶
4℃
说明书
一份
试剂五： 液体 15μL×1 瓶，-20℃保存。临用前加入 0.3ml 试剂三稀释，4℃保存。
试剂六：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 20 ml 试剂三溶解，现配现用。
自备仪器和用品：
低温离心机、水浴锅、可调节移液器、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、和蒸馏水。
粗酶液提取：
1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 试剂
一）进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清液（如上清不清澈，再离心 3min）待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（10 4个）：试剂一体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加
入 1ml 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；8000g 4℃离
心 10min，取上清液（如上清不清澈，再离心 3min）混匀待测。
3. 血清等液体：直接测定。最终解释权所有 © 伊势久（江苏连云港）生物科技有限责任公司，保留一切权利
服务热线：0518-81263339
官网:http:
伊势久(江苏连云港)生物科技有限责任公司
江苏省连云港市海州区花果山大道 17 号
GSSG 含量测定：
1. 分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长到 412nm，蒸馏水调零。
2. 试剂三置于 25℃（一般物种）或者 37℃（哺乳动物）水浴中保温 30min。
3.取 1 ml EP 管，加入 100μ l 上清液，5 μ l 试剂二，盖紧后混匀，得混合液，置于 37℃水浴 30min；取 21μ
l 混合液于 96 孔板，然后依次加入 20 μ l 试剂四、2 μ l 试剂五和 140 μ l 试剂六，迅速混匀后，测定 30 s
和 150 s 光吸收 A1 和 A2，计算ΔA=A2-A1。
GSSG 含量计算公式：
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、标准条件下测定的回归方程为 y=0.0276x-0.0011；x 为标准品浓度（nmol/ml），y 为吸光值(ΔA)。
2、 按蛋白浓度计算
GSSG（nmol/mg prot）=(ΔA+0.0011)÷0.0276×V 样÷(V 样×Cpr)
=36.23×(ΔA+0.0011)÷Cpr
3、按样本鲜重计算
GSSG（nmol /g 鲜重）=(ΔA+0.0011)÷0.0276×V 样÷(V 样÷V 样总×W)
=36.23×(ΔA+0.0011)÷W
4、按细胞数量计算
GSSG（nmol/10 4 cell）=(ΔA+0.0011)÷0.0276×V 样÷(V 样÷V 样总×细胞数量)
=36.23×(ΔA+0.0011)÷细胞数量
5、按照液体体积计算
GSSG（nmol/ml）=(ΔA+0.0011)÷0.0276×V 样÷V 样
=36.23×(ΔA+0.0011)
V 样：反应中加入样本体积，20μL；V 样总：加入提取液体积， 1ml；W：样品质量，g，Cpr：样本蛋白
浓度（mg/ml）
b.使用 96 孔板测定的计算公式如下
1、标准条件下测定的回归方程为 y=0.0138x-0.0011；x 为标准品浓度（nmol/ml），y 为吸光值(ΔA)。
2、 按蛋白浓度计算
GSSG（nmol/mg prot）=(ΔA+0.0011)÷0.0138×V 样÷(V 样×Cpr)
=72.46×(ΔA+0.0011)÷Cpr
3、按样本鲜重计算
GSSG（nmol /g 鲜重）=(ΔA+0.0011)÷0.0138×V 样÷(V 样÷V 样总×W)
=72.46×(ΔA+0.0011)÷W
4、按细胞数量计算
GSSG（nmol/10 4 cell）=(ΔA+0.0011)÷0.0138×V 样÷(V 样÷V 样总×细胞数量)
=72.46×(ΔA+0.0011)÷细胞数量
5、按照液体体积计算
GSSG（nmol/ml）=(ΔA+0.0011)÷0.0138×V 样÷V 样
=72.46×(ΔA+0.0011)最终解释权所有 © 伊势久（江苏连云港）生物科技有限责任公司，保留一切权利
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V 样：反应中加入样本体积，20μL；V 样总：加入提取液体积， 1ml；W：样品质量，g，Cpr：样本蛋白
浓度（mg/ml）
注意事项：
1. 提取过程中去掉蛋白质，所以提取液不能用于测定蛋白含量。
2. 临用前配制的试剂配好后 4℃保存，2 天内使用完毕。
3. 最低检出限为 0.1μmol/L。
4. 反应温度严格来说，为保证重复性，应在 25℃下进行反应。
5. 反应时间需精确控制，否则会影响反应速率计算，产生较大误差。
6. 样品中的 GSSG 浓度尽可能低一些，否则反应速率太大，没法控制，所以稀释倍数要尽量大些。
