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谷氨酸(Glu)检测试剂盒(微量法 100T/96S)
AC004
Glutamic Acid Content Assay Kit (Microassay)
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AC004-100T/96S 100T/96S ¥600.00

谷氨酸(glutamic acidGlu)含量测定试剂盒说明书

                                                   微量法 100/96

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定                                             

测定意义:

Glu广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,不仅是组成蛋白质的20种氨基酸之一,而且通过转氨基作用参与多种氨基酸合成,是生物体内主要氨基来源之一。此外,Glu还是味精的主要有效成分,常用做食品添加剂以及香料生产。

测定原理:

利用专用提取液提取,然后用显色剂进行显色,显色后在570nm下进行测定。

组成:

产品名称

AC004-100T/96S

Storage

试剂一:液体

120ml

4

试剂二:粉剂

1

4

说明书

1

 

试剂二临用前加入5ml蒸馏水充分溶解混匀,用不完的试剂仍 4℃保存。

自备仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰、蒸馏水。

谷氨酸提取:

1、细菌或培养细胞样品:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):试剂一体积(ml)为500~10001的比例(建议500万细菌或细胞加入1ml试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 常温离心10min,取上清,置冰上待测。

2、组织样品:按照组织质量(g):试剂一体积(ml)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml试剂一),进行冰浴匀浆。8000g 常温离心10min,取上清,置冰上待测。

3、血清(浆)或细胞培养液样品:按照血清(浆)或细胞培养液体积(ml):试剂一体积(ml)15~10的比例(建议取0.1ml血清(浆)或者细胞培养液加入1ml试剂一),进行冰浴匀浆。8000g 常温离心10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至570nm,蒸馏水调零。

2、在有盖EP管中加入下列试剂:

试剂名称(μl

测定管

对照管

样本

250

 

试剂一

 

250

试剂二

50

50

混匀,90℃水浴20min(盖紧,以防止水分散失),流水冷却,取200uL至微量石英比色皿或96孔板中,于570nm波长处记录吸光值A。△A=A测定管-A对照管。对照管只要做一管。

谷氨酸含量计算:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、标准条件下测定回归方程为y = 0.0074x- 0.5255x为谷氨酸含量(µg/ml),y为吸光值。

2、按照血清(浆)或者细胞培养液体积计算

谷氨酸含量(μg/ml)= [(A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(V3×V1÷V2=1351×(A+0.5255)

3、按照蛋白浓度计算

谷氨酸含量(µg/mg prot)=[(A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(V1×Cpr)=135.1×(A+0.5255) ÷Cpr

4、按照样本质量计算

谷氨酸含量(µg/g鲜重)=[(A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(W ×V1÷V2)=135.1×(A+0.5255) ÷W

5、按照细菌或细胞密度计算

谷氨酸含量(μg/104 cell)=[(A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(500×V1÷V2)=0.27×(A+0.5255)

V1:加入反应体系中样本体积,0.25mlV2:加入提取液体积,1 mlV3:加入血清(浆)或细胞培养液体积,0.1 ml Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mlW:样本质量,g500:细菌或细胞总数,500万。

b.96孔板测定的计算公式如下

1、标准条件下测定回归方程为y = 0.0037x- 0.5255x为谷氨酸含量(µg/ml),y为吸光值。

2、按照血清(浆)或者细胞培养液体积计算

谷氨酸含量(μg/ml)= [(A +0.5255)÷0.0037×V1]÷(V3×V1÷V2=2703×(A+0.5255)

3、按照蛋白浓度计算

谷氨酸含量(µg/mg prot)=[(A +0.5255)÷0.0164×V1]÷(V1×Cpr)=270.3×(A+0.5255) ÷Cpr

4、按照样本质量计算

谷氨酸含量(µg/g鲜重)= [(A +0.5255)÷0.0164×V1]÷(W ×V1÷V2)=270.3×(A+0.5255) ÷W

5、按照细菌或细胞密度计算

谷氨酸含量(μg/104 cell)=[(A +0.5255)÷0.0164×V1]÷(500×V1÷V2)=0.541×(A+0.5255)

V1:加入反应体系中样本体积,0.25mlV2:加入提取液体积,1 mlV3:加入血清(浆)或细胞培养液体积,0.1 ml Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mlW:样本质量,g500:细菌或细胞总数,500万。

注意:

1、该试剂盒仅适用于发酵液或组织中谷氨酸含量测定,检测下限为100µg/ml

2、标准曲线线性范围为:100µg/ml -600µg/ml

3、ΔA线性范围为:0.01-1;若大于1则需要将上清液用试剂一稀释至适当倍数后测定,计算公式中乘以相应稀释倍数。

象形图
警示语
Class
警告声明
UNub
危险声明
Packing Group
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