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半胱氨酸(cysteine, Cys)含量测定检测试剂盒(微量法, 100T/96S)
AC018
Cysteine Content Assay Kit (Microassay)
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AC018-100T/96S 100T/96S ¥650.00

半胱氨酸(cysteine, Cys)含量测定试剂盒说明书

   微量法 100T/96S

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定                                            测定意义:

蛋白质含有三种含硫氨基酸:甲硫氨酸胱氨酸Cys。其中,Cys是唯一一种含有巯基的含硫氨基酸,从甲硫氨酸转化而来,并且可与胱氨酸互相转化。Cys参与蛋白质二硫键的形成,经常是蛋白质活性中心的组成部分,还可以为其它生理生化反应提供巯基。此外,Cys大量积聚在皮肤和粘膜表面,在角蛋白生成中维持重要的巯基酶的活性,并且补充巯基,以维持皮肤的正常代谢,调节表皮最下层的色素细胞生成的底层黑色素。具有美白、解毒、改善炎症和过敏性皮肤等作用。

测定原理:

Cys还原磷钨酸生成钨蓝,在600nm处有吸收峰;通过600nm吸光度,计算Cys含量。

组成:

产品名称

AC018-100T/96S

Storage

试剂一:液体

1

4℃

试剂二:液体

1

4℃

试剂三:粉剂

1

4℃ 

标准品:粉剂

1

4℃ 避光

说明书

1

 

试剂三用前1天,向试剂三中加2.5ml蒸馏水充分溶解,再加85%磷酸0.625ml,混匀后盖紧(防止水分散失)沸水浴2h;冷却后加10ml蒸馏水,4℃可保存2周。

标准品临用前加10 ml蒸馏水,充分溶解。1μmol/ml标准液,4℃避光保存。用不完的试剂4℃可保存3天。

自备仪器和用品:

低温离心机、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、85磷酸和蒸馏水。

半胱氨酸提取:

1.液体样品中半胱氨酸提取:取0.1ml液体样品,加试剂一0.9ml,充分混匀,8000g

4℃离心10min,取上清液,待测。

2.组织中半胱氨酸提取:按照组织质量(g):试剂一体积(ml)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml试剂一)进行冰浴匀浆,8000g 4℃离心10 min,取上清液待测。

3. 细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):试剂一体积(ml)为500~10001的比例(建议500万细菌或细胞加入1ml试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤:

1. 分光光度计/酶标仪预热30 min,调节波长到600 nm,蒸馏水调零。

2. 空白管:取微量石英比色皿/96孔板,加入20μl蒸馏水,100μl试剂二,100μl试剂三,混匀后室温静置15 min,于600nm处测定吸光值,记为A空白管。

3. 标准管:取微量石英比色皿/96孔板,加入20μl标准液,100μl试剂二,100μl试剂三,混匀后室温静置15 min,于600nm处测定吸光值,记为A标准管。

4. 测定管:取微量石英比色皿/96孔板,加入20μl上清液,100μl试剂二,100μl试剂三,混匀后室温静置15 min,于600nm处测定吸光值,记为A测定管。

注意:空白管和标准管只需要做一次。

计算公式:

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1. 按液体样品的体积计算:

半胱氨酸含量(μmol/ml=[C标准品×V标准品×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]×V样总÷V样)=1×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)

2. 按样本质量计算:

半胱氨酸含量(μmol/g 鲜重)=[C标准品×V标准品×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]×V样总÷V样)÷W=1×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管) ÷W

3. 按照蛋白浓度计算:

半胱氨酸含量(μmol /mg prot= [C标准品×V标准品×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]÷V×Cpr=1×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管) ÷Cpr

4. 按细胞数量计算:

氨基酸含量(μmol /104 cell=[C标准品×V标准品×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)] ×V样总÷V×细胞数量)=1×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管) ÷细胞数量

C标准品:标准品浓度,1 μmol/mlV标准品:反应体系中加入标准品体积,0.02mlV样:反应体系中加入样品提取液体积,0.02 mlV样总:样品提取液,1mlW:样品质量,g

b.使用96孔板测定的计算公式如下

1. 按液体样品的体积计算:

半胱氨酸含量(μmol/ml=[C标准品×V标准品×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]×V样总÷V样)=1×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)

2. 按质量计算:

半胱氨酸含量(μmol/g 鲜重)=[C标准品×V标准品×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]×V样总÷V样)÷W=1×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管) ÷W

3. 按照蛋白浓度计算:

半胱氨酸含量(μmol /mg prot= [C标准品×V标准品×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]÷V×Cpr=1×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管) ÷Cpr

4. 按细胞数量计算:

氨基酸含量(μmol /104 cell=[C标准品×V标准品×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)] ×V样总÷V×细胞数量)=1×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管) ÷细胞数量

C标准品:标准品浓度,1 μmol/mlV标准品:反应体系中加入标准品体积,0.02mlV样:反应体系中加入样品提取液体积,0.02 mlV样总:样品提取液,1mlW:样品质量,g

注意事项:

最低检出限为100μmol/L

 

 

 

象形图
警示语
Class
警告声明
UNub
危险声明
Packing Group
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