半胱氨酸（cysteine, Cys）含量测定试剂盒说明书
分光光度法 50管/48样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
蛋白质含有三种含硫氨基酸：甲硫氨酸、胱氨酸和Cys。其中，Cys是唯一一种含有巯基的含硫氨基酸，从甲硫氨酸转化而来，并且可与胱氨酸互相转化。Cys参与蛋白质二硫键的形成，经常是蛋白质活性中心的组成部分，还可以为其它生理生化反应提供巯基。此外，Cys大量积聚在皮肤和粘膜表面，在角蛋白生成中维持重要的巯基酶的活性，并且补充巯基，以维持皮肤的正常代谢，调节表皮最下层的色素细胞生成的底层黑色素。具有美白、解毒、改善炎症和过敏性皮肤等作用。
测定原理：
Cys还原磷钨酸生成钨蓝，在600nm处有吸收峰；通过600nm吸光度，计算Cys含量。
组成：
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产品名称
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AC017-50T/48S
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Storage
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试剂一：液体
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1瓶
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4℃
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试剂二：液体
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1瓶
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4℃
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试剂三：粉剂
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1瓶
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4℃
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标准品：粉剂
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1瓶
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4℃ 避光
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说明书
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1份
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试剂三用前1天，向试剂三中加5 ml蒸馏水充分溶解，再加85％磷酸1.25ml，混匀后盖紧（防止水分散失）沸水浴2h；冷却后加20 ml蒸馏水，4℃可保存2周。
标准品临用前加10 ml蒸馏水，充分溶解。1μmol/ml标准液，4℃避光保存。用不完的试剂4℃可保存3天。
自备仪器和用品：
可见分光光度计、低温离心机、可调式移液枪、1ml玻璃比色皿、85％磷酸和蒸馏水。
半胱氨酸提取：
1. 液体样品中半胱氨酸提取：取0.1ml液体样品，加试剂一0.9ml，充分混匀，8000g
4℃离心10min，取上清液，待测。
2. 组织中半胱氨酸提取：按照组织质量（g）：试剂一体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml试剂一）进行冰浴匀浆，8000g 4℃离心10 min，取上清液待测。
3. 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：试剂一体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1ml试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定操作：
1. 分光光度计预热30 min，调节波长到600 nm，蒸馏水调零。
2. 空白管：取1ml玻璃比色皿，加入100 μl蒸馏水，500μl试剂二，500μl试剂三，混匀后室温静置15 min，于600nm处测定吸光值，记为A空白管。
3. 标准管：取1ml玻璃比色皿，加入100 μl标准液，500μl试剂二，500μl试剂三，混匀后室温静置15 min，于600nm处测定吸光值，记为A标准管。
4. 测定管：取1ml玻璃比色皿，加入100 μl上清液，500μl试剂二，500μl试剂三，混匀后室温静置15 min，于600nm处测定吸光值，记为A测定管。
注意：空白管和标准管只需要做一次。
计算公式：
1. 按液体样品的体积计算：
半胱氨酸含量（μmol/ml）=[C标准品×V标准品×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)]×（V样总÷V样）=1×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)
2. 按样本质量计算：
半胱氨酸含量（μmol/g鲜重）=[C标准品×V标准品×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)]×（V样总÷V样）÷W=1×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管) ÷W
3. 按照蛋白浓度计算：
半胱氨酸含量（μmol /mg prot）= [C标准品×V标准品×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)]÷（V样×Cpr）=1×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管) ÷Cpr
4. 按细胞数量计算：
氨基酸含量（μmol /104 cell）=[C标准品×V标准品×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)] ×（V样总÷V样×细胞数量）=1×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管) ÷细胞数量
C标准品：标准品浓度，1μmol/ml；V标准品：反应体系中加入标准品体积，0.1 ml；V样：反应体系中加入样品提取液体积，0.1 ml；V样总：加入提取液体积，1ml。W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml。
注意事项：
最低检出限为100μmol/L。
