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焦磷酸:果糖-6-磷酸-1-磷酸转移酶(PFP)检测试剂盒 (分光光度法50T/48S)
PSS016
Pyrophosphate: Fructose-6-Phosphate-1-Phosphatransferase (PFP) Activity Assay Kit (Spectrophotometry)
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PSS016-50T/48S 50T/48S ¥1300.00

焦磷酸:果糖-6-磷酸-1-磷酸转移酶(Pyrophosphate: fructose-6 – phosphate-1-phosphoric acid transferasePFP)试剂盒说明书                                                                                                 

                                                  分光光度法 50/48

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定                                             

测定意义:

焦磷酸:果糖-6-磷酸-1-磷酸转移酶(PFPEC2.7.1.90)是一种胞质酶,广泛存在于植物组织中,催化果糖-6-磷酸与果糖-1,6-二磷酸之间的可逆转化,在光合作用碳代谢中起重要作用。

测定原理:

PFP催化6-磷酸果糖转化为1,6-二磷酸果糖,它在醛缩酶和磷酸丙糖异构酶的作用下转变为3-磷酸甘油醛,再由3-磷酸甘油醛脱氢酶和NADH催化生成3-磷酸甘油酸、NAD和磷酸,340nm处的吸光度变化反映了PFP的活性的高低。

组成:

产品名称

PSS016-50T/48S

Storage

提取液:液体

50ml

4℃

试剂一:液体

30ml

4℃避光

试剂二:粉剂

1

-20避光

试剂三:粉剂

1

-20避光

试剂液体

0.5ml

4℃避光

试剂五:液体

0.5ml

4℃避光

试剂:液体

5ml

4℃避光

说明书

一份

试剂二:粉剂×1 瓶,-20℃避光保存。临用前加5ml蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

试剂三:粉剂×1瓶,-20℃避光保存。临用前加5 ml蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

试剂四:液体0.5ml×1瓶,4℃避光保存。

试剂五:液体0.5ml×1瓶,4℃避光保存。

试剂六:液体5ml×1瓶,4℃避光保存。

自备仪器和用品:

天平、低温离心机、研钵、紫外分光光度计、1 ml石英比色皿。

酶液提取:

1. 组织:按照质量(g):提取液体积(ml)15~10的比例(建议称取约0.1g,加入1ml提取液)加入提取液,冰浴匀浆后于4℃10000g离心10min,取上清置冰上待测。

2. 细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500~10001的比例(建议500万细胞加入1ml提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后4℃10000g离心10min,取上清置冰上待测。

3. 液体:直接检测。

测定步骤:

1. 分光光度计预热30min,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

2. 1ml石英比色皿,依次加入580μl试剂一,100μl试剂二,100μl试剂三,10μl试剂四,10μl试剂五,100μl试剂六,100μl粗酶液,充分混匀,记录340nm10s的吸光值A1310s的吸光值A2△A=A1-A2

计算公式

1)按照样本蛋白浓度计算

酶活单位定义:每毫克组织蛋白每分钟消耗1 nmolNADH定义为一个酶活力单位。

PFPnmol/min/mg prot=ΔA÷ε×d×V反总÷(V×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr

2)按照样本质量计算

酶活单位定义:每克组织每分钟消耗1 nmolNADH定义为一个酶活力单位。

PFPnmol/min /g 鲜重)=ΔA÷ε×d×V反总÷(W ×V÷V样总) ÷T=321.54×ΔA÷W

3)按照细胞数量计算

酶活单位定义:每104个细胞每分钟消耗1 nmolNADH定义为一个酶活力单位。

PFPnmol/min /104 cell= ΔA÷ε×d×V反总÷(V×细胞数量÷V样总) ÷T

=321.54×ΔA÷细胞数量

4)按照液体体积计算

酶活单位定义:每毫升液体每分钟消耗1 nmolNADH定义为一个酶活力单位。

PFPnmol/min /ml=ΔA÷ε×d×V反总÷V÷T=321.54×ΔA

V反总:反应体系总体积,1mlεNADH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cmd:比色皿光径,1cmV样:加入样本体积,0.1mlV样总:加入提取液体积,1mlT:反应时间,5 minCpr:样本蛋白质浓度,mg/mlW:样本质量,g

 

 

象形图
警示语
Class
警告声明
UNub
危险声明
Packing Group
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