乙醇酸氧化酶（glycollic oxidase, GO）试剂盒说明书
微量法 100T/96S
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
乙醇酸氧化酶（EC1.1.3.1）是植物光呼吸代谢中的关键酶，也是光下合成草酸的关键酶，它催化乙醇酸氧化生成乙醛酸，对研究光呼吸代谢过程及其调控具有重要意义。
测定原理：
乙醇酸氧化酶催化乙醇酸氧化生成乙醛酸，乙醛酸和盐酸苯肼反应生成乙醛酸苯腙，在324nm有特征吸收峰。
组成：
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产品名称 |
PSS021-100T/96S |
Storage |
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提取液：液体 |
100ml |
4℃ |
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试剂一：液体 |
15ml |
4℃ |
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试剂二：粉剂 |
1瓶 |
4℃避光 |
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试剂三：液体 |
2ml |
4℃ |
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说明书 |
一份 |
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试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存，临用前加5ml双蒸水溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
自备仪器和用品：
天平、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板（UV板）。
酶液提取：
按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液），进行冰浴匀浆。12000g， 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定操作表：
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测定管 |
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样本（μl） |
10 |
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试剂一（μl） |
130 |
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试剂二（μl） |
40 |
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试剂三（μl） |
20 |
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充分混匀，立即于微量石英比色皿/96孔板中测定324nm处10s和190s吸光值A1和A2，△A=A2- A1 |
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酶活性计算公式
a．用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1．按照蛋白浓度计算
酶活性定义：每毫克蛋白每分钟氧化1nmol乙醇酸所需的酶量为一个酶活力单位。
GO活性（nmol/min /mg prot）= 
×V反总÷（V样×Cpr）÷T= 392×△A÷Cpr
2．按照样本质量计算
酶活性定义：每克组织每分钟氧化1 nmol乙醇酸所需的酶量为一个酶活力单位。
GO活性（nmol/min /g 鲜重）= 
×V反总÷（V样×W÷V样总）÷T= 392×△A÷W
ε：乙醛酸苯腙毫摩尔消光系数：17L/mmol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应总体积，0.2ml；V样：反应中样本体积，0.01ml；V样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；W，样本质量，g；T：反应时间，3min
b. 用96孔板测定的计算公式如下
1．按照蛋白浓度计算
酶活性定义：每毫克蛋白每分钟氧化1nmol乙醇酸所需的酶量为一个酶活力单位。
GO活性（nmol/min /mg prot）= 
×V反总÷（V样×Cpr）÷T= 784×△A÷Cpr
2．按照样本质量计算
酶活性定义：每克组织每分钟氧化1nmol乙醇酸所需的酶量为一个酶活力单位。
GO活性（nmol/min /g 鲜重）= 
×V反总÷（V样×W÷V样总）÷T= 784×△A÷W
ε：乙醛酸苯腙毫摩尔消光系数：17L/mmol/cm；d：比色皿光径，0.5cm；V反总：反应总体积，0.2ml；V样：反应中样本体积，0.01ml；V样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；W，样本质量，g；T：反应时间，3min
| 象形图 | |
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| 警示语 | |
| Class | |
| 警告声明 | |
| UNub | |
| 危险声明 | |
| Packing Group |
| PSS021 乙醇酸氧化酶（GO）检测试剂盒（微量法 100T96S）.pdf | 下载 |
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