类胡萝卜素(carotenoid)含量试剂盒说明书
分光光度法 50管/48样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
类胡萝卜素是一种脂溶性且具有营养特性的化合物,给植物和动物提供天然色素,是重要的抗氧化剂,并有能力转换为必需维生素。类胡萝卜素可预防细胞,组织和基因损毁,增强身体免疫系统,抵御感染,减少癌症风险,保护心脏。
测定原理:
样品通过混合有机溶剂萃取,类胡萝卜素与非类胡萝卜素成分分离,在448nm处有特征吸收峰。
组成:
产品名称
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PSS018-50T/48S
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Storage
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试剂一:液体
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100ml×3
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4℃
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试剂二:液体
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100ml
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4℃
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试剂三:液体
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80ml
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4℃
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试剂四:粉剂
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自备(正己烷)
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说明书
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一份
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自备仪器和用品:
天平、烘箱,100目筛、三角瓶或烧杯、漏斗,纱布、玻璃试管、可见分光光度计、1 ml玻璃比色皿、正己烷
样本处理:
提取:称取0.5g样本,加入1.5ml试剂一 ,冰浴匀浆,超声破萃取15min(可改用振荡金属浴),15000g 25℃离心5min,取上层液转入10ml离心管中,沉淀用1.5ml试剂一重复提取2次,并将上层液并入上述10ml离心管中作为提取出的非皂化类胡萝卜素样品。
皂化:向上述非皂化类胡萝卜素样品中加入2ml试剂二,混匀,25℃室温避光皂化过夜,皂化完成后,加入3ml试剂三,混匀后,5000g 25℃离心5min,将上层类胡萝卜素提取相转入5ml离心管,用正己烷定容到5ml,置冰上待测。
测定步骤:
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空白管
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测定管
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样本(μl)
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1000
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正己烷(μl)
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1000
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于1ml玻璃比色皿,迅速测定450nm处吸光值A,分别记为A空白管和A测定管,△A=A测定管-A空白管
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注意:空白管只需测定一次。
计算公式:
类胡萝卜素含量(μg/g鲜重)= △A×V样总÷(ε×d)÷W
= 31.25×△A÷W
V样总:提取液总体积,5ml;ε:类胡萝卜素消光系数,0.16;d:比色皿光径,1cm; W:样本质量,g
注意事项:
1. 提取液易挥发,有毒性,操作时做好防护措施。
2. 测定必须能迅速,防止挥发造成误差。