游离胆固醇（free cholesterol, FC）含量测定试剂盒说明书
微量法 100T/96S
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
FC是构成细胞膜的主要成分，也是合成肾上腺皮质激素、性激素、胆汁酸及维生素D等生理活性物质的重要原料。FC浓度可作为脂代谢的指标。
测定原理：
FC氧化酶催化FC生成△4-胆甾烯酮和H2O2，过氧化物酶催化H2O2、4-氨基安替比林和酚生成红色醌类化合物，在500nm有吸收峰，其颜色深浅与FC含量成正比。
组成：
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产品名称
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FA024-100T/96S
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Storage
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试剂一：异丙醇（自备）
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100ml
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--
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试剂二：液体
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20ml
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4℃
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试剂三：粉剂
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1瓶
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4℃
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试剂四：液体
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40μl
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4℃
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TC标准品：液体
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1ml
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4℃
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说明书
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一份
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TC标准品：液体1ml×1支，0.5μmol/ml，4℃保存。
自备仪器和用品：
水浴锅、可调式移液枪、酶标仪、96孔板、异丙醇和蒸馏水。
FC的提取：
1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml试剂一）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
2．细菌、真菌：先收集400-500万细胞或细菌到离心管内，弃上清，加1ml试剂一，超声波破碎1min（强度20％，超声2s，停1s），即FC待测液。
3．血清（浆）样品：直接测定。
测定操作：
1. 酶标仪预热30 min，调节波长到500 nm。
2. FC工作液的配制：临用前，吸取约0.8ml试剂二分别加入试剂三和试剂四瓶中，充分溶解后再全部转移回试剂二瓶中，充分混匀，FC工作液置于37℃水浴10min。用不完的工作液4℃保存一周。
3. 标准管：依次在96孔板中加入20μl FC标准液和180μl FC工作液，混匀，37℃静置3h后于500nm测定A标准管。
4. 测定管：依次在96孔板中加入20μl FC待测液和180μl FC工作液，混匀，37℃静置3h后于500nm测定A测定管。
5、空白管：依次在96孔板中加入20μl 试剂一和180μl FC工作液，混匀，37℃静置3h后于500nm测定A测定管。
注意事项：
1、 标准管和空白管只要做一管。
2、 若测定管产生白色浑浊，可以将待测液用异丙醇稀释2~5倍后测定，并在最后结果乘以相应倍数。
计算公式：
1. 血清（浆）中FC含量计算：
FC含量（μmol /dL）= C标准液×（A测定管-A空白管）÷（A标准管-A空白管）×100ml
=50×（A测定管-A空白管）÷（A标准管-A空白管）
C标准液：0.5μmol/ml；100 ml：1dL=100 ml。
2. 组织中FC含量计算：
(1)按样本蛋白浓度计算
FC含量（μmol / mg prot）= C标准液×（A测定管-A空白管）÷（A标准管-A空白管）÷Cpr
= 0.5×（A测定管-A空白管）÷（A标准管-A空白管）÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
FC含量（μmol / g 鲜重）= C标准液×（A测定管-A空白管）÷（A标准管-A空白管）÷W
= 0.5×（A测定管-A空白管）÷（A标准管-A空白管）÷W
C标准液：0.5μmol/ml；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；W：样本质量，g/ml
3. 细胞、细菌中FC含量计算：
FC含量（μmol /104 cell）= C标准液×（A测定管-A空白管）÷（A标准管-A空白管）÷细菌或细胞（104 cell /L）
=0.5×（A测定管-A空白管）÷（A标准管-A空白管）÷细菌或细胞（104 cell /L）
C标准液：0.5μmol/ml。
最低检出限为1nmol/ml。
