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脂蛋白酯酶(LPL)检测试剂盒(分光光度法50T/24S)
FA033
Lipoprotein Lipase (LPL) Activity Assay Kit (Spectrophotometry)
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FA033-50T/24S 50T/24S ¥430.00

脂蛋白酯酶(Lipoprotein lipaseLPL)试剂盒说明书

                                                  分光光度法 50/24

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定                                             

测定意义:

脂蛋白酯酶是脂肪细胞、心肌细胞、骨骼肌细胞、乳腺细胞及巨噬细胞等实质细胞合成的一种酶,可催化甘油三脂水解为脂肪酸和单酸甘油酯,以供组织氧化供能和贮存,并在不同的组织表现出不同的生理意义。

测定原理:

脂蛋白酯酶水解4-硝基苯棕榈酸酯产生4-硝基苯酚,在400nm有特征吸收峰。

组成:

产品名称

FA033-50T/24S

Storage

试剂一:液体

60ml

4℃

试剂二:液体

10ml

4℃避光

试剂三:液体

25ml

4℃

说明书

一份

自备仪器和用品:

天平、冷冻离心机、研钵、水浴锅、可见分光光度计、1 ml玻璃比色皿。

样品处理:

1. 组织:按照质量(g):试剂一体积(ml)15~10的比例(建议称取约0.1g,加入1ml试剂一)加入试剂一,冰浴匀浆后于4℃10000g离心10min,取上清待测。

2. 细胞:按照细胞数量(104个):试剂一体积(ml)为500~10001的比例(建议500万细胞加入1ml试剂一)加入试剂一,冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后于4℃10000g离心10min,取上清待测。

3. 血清:直接测定。

测定操作:

 

对照管

测定管

样品(μl

100

100

试剂一(μl

400

 

试剂二(μl

 

400

混匀,45水浴10min

试剂三(μl

500

500

充分混匀,25℃静置2min,于1ml玻璃比色皿,蒸馏水调零,测定400nm处吸光值,记为A对照管和A测定管,A=A测定管- A对照管

计算公式:

标准曲线:y= 0.0581x -0.0169R2=0.9982

1.按照蛋白浓度计算

酶活性定义45pH7.5条件下,每毫克蛋白每分钟水解产生1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。

LPL活性(μmol /min/mg prot= A+0.0169÷ 0.0581×V反总÷V×Cpr÷T

= 17.21×A+0.0169÷Cpr

2.按照样本质量计算

酶活性定义45pH7.5条件下,每克组织每分钟水解产生1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。

LPL活性(μmol /min /g 鲜重)=A+0.0169÷0.0581×V反总÷W×V÷V样总)÷T

= 17.21×A+0.0169÷W

3.按照细胞数量计算

酶活性定义45pH7.5条件下,104个细胞每分钟水解产生1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。

LPL活性(μmol /min /104 cell= A+0.0169÷0.0581×V反总÷V×细胞数量÷V样总)÷T

                                        = 17.21×A+0.0169÷细胞数量

4.按照液体体积计算

酶活性定义45pH7.5条件下,每毫升血清每分钟水解产生1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。

LPL活性(μmol /min /ml=A+0.0169÷0.0581×V反总÷V÷T

                                 = 17.21×A+0.0169

V反总:反应总体积,1mlV样:反应体系中加入样本体积,0.1mlW:样本质量,gV样总:加入提取液体积,1mlT:反应时间,10min

注意事项:

1. 试剂三加入混匀后静置两分钟立即测定,否则影响吸光值。

2. 吸光值过高或者测定结果不稳定,则将酶液进行适当的稀释,并在计算公式中乘以稀释倍数。

象形图
警示语
Class
警告声明
UNub
危险声明
Packing Group
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