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磷脂酶A2(PLA2)检测试剂盒(微量法100T/48S)
FA030
Phospholipase A2 (PLA2) Activity Assay Kit (Microassay)
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FA030-100T/48S 100T/48S ¥6800.00

 

磷脂酶A2phospholipase A2PLA2)试剂盒说明书

                                                    微量法100T/48S

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定                                             

测定意义:

磷脂酶A2EC3.1.1.4)是磷脂sn-2位脂酰基水解酶,广泛存在于动植物组织、细菌、细胞核分泌物中,参与脂肪消化,精子成熟、细胞信号传递、脂质过氧化修复、宿主反应等生理过程,在控制体内磷脂类物质平衡、调节机体新陈代谢、参与疾病的病理进程等方面发挥着及其重要的作用。

测定原理:

磷脂酶A2作用于2-硫代十六酰乙基磷酸胆碱(HEPC)产生游离巯基,与DTNB反应生成黄色物质,在412nm处有特征吸收峰。

组成:

产品名称

FA030-100T/48S

Storage

提取液:液体

100ml

4℃

试剂一:液体

100ml

4℃

试剂二:液体

20ml

4℃避光

试剂三:液体

5

4℃

说明书

一份

试剂三:液体×5瓶,-20℃避光保存。临用前根据用量每瓶加入1.8ml试剂二充分混匀;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

自备仪器和用品:

天平、超速冷冻离心机、研钵、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板

样品处理

1. 组织:按照质量(g):提取液体积(ml)15~10的比例(建议称取约0.1g,加入1ml提取液)加入提取液,冰浴匀浆后于4℃10000g离心5min,取全部上清于4℃100000g离心30min,弃上清,取沉淀溶于1ml试剂一。

2. 细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500~10001的比例(建议500万细胞加入1ml提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后于4℃10000g离心5min,取全部上清于4℃100000g离心30min,弃上清,取沉淀溶于1ml试剂一。

3. 血清:直接测定。

4.          

测定操作:

 

对照管

测定管

样品(μl

20

20

试剂二(μl

180

 

试剂三(μl

 

180

充分混匀,37℃反应10min,于微量石英比色皿/96孔板,蒸馏水调零,测定412nm处吸光值,记为A对照管和A测定管,△A=A测定管- A对照管

酶活计算公式:

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1.按照蛋白浓度计算

酶活性定义每毫克蛋白每分钟水解HEPC产生1nmol游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。

PLA2活性(nmol/min/mg prot= △A÷彩色印刷图库×d×V反总÷V×Cpr÷T

= 73.53×△A÷Cpr

2.按照样本质量计算

酶活性定义每克组织每分钟水解HEPC产生1nmol游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。

PLA2活性(nmol/min/g 鲜重)= △A÷彩色印刷图库×d×V反总÷W×V÷V样总)÷T

= 73.53×△A÷W

3. 细胞数量计算

酶活性定义104个细胞每分钟水解HEPC产生1nmol游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。

PLA2活性(nmol/min/104 cell= △A÷彩色印刷图库×d×V反总÷V×细胞数量÷V样总)÷T

                     = 73.53×△A÷细胞数量

4按照液体体积计算

酶活性定义每毫升血清每分钟水解HEPC产生1nmol游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。

PLA2活性(nmol/min/ml= △A÷彩色印刷图库×d×V反总÷V÷T

= 73.53×△A

彩色印刷图库TNB消光系数,13600L/mol/cmd:比色皿光径,1cmV反总:反应总体积,1mlV样:反应体系中加入样本体积,0.1mlW:样本质量,gV样总:加入提取液体积,1ml

T:反应时间,10min

b. 96孔板测定的计算公式如下

1.按照蛋白浓度计算

酶活性定义每毫克蛋白每分钟水解HEPC产生1nmol游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。

PLA2活性(nmol/min/mg prot= △A÷彩色印刷图库×d×V反总÷V×Cpr÷T

=147.06×△A÷Cpr

2.按照样本质量计算

酶活性定义每克组织每分钟水解HEPC产生1nmol游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。

PLA2活性(nmol/min/g 鲜重)= △A÷彩色印刷图库×d×V反总÷W×V÷V样总)÷T

= 147.06×△A÷W

3. 细胞数量计算

酶活性定义104个细胞每分钟水解HEPC产生1nmol游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。

PLA2活性(nmol/min/104 cell= △A÷彩色印刷图库×d×V反总÷V×细胞数量÷V样总)÷T

                     =147.06×△A÷细胞数量

4按照液体体积计算

酶活性定义每毫升血清每分钟水解HEPC产生1nmol游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。

PLA2活性(nmol/min/ml= △A÷彩色印刷图库×d×V反总÷V÷T

= 147.06×△A

彩色印刷图库TNB消光系数,13600L/mol/cmd:比色皿光径,0.5cmV反总:反应总体积,1mlV样:反应体系中加入样本体积,0.1mlW:样本质量,gV样总:加入提取液体积,1ml

T:反应时间,10min

象形图
警示语
Class
警告声明
UNub
危险声明
Packing Group
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