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谷氨酸脱氢酶(GDH)检测试剂盒(分光光度50T/48S)
NM003
Glutamate Dehydrogenase (GDH) Activity Assay Kit(Spectrophotometry)
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NM003-50T/48S 50T/48S ¥650.00

 

谷氨酸脱氢酶(Glutamate dehydrogenaseGDH)试剂盒说明书

                                                  分光光度法 50/48

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定                                             

测定意义:

GDHEC 1.4.1.2)广泛分布于植物中,和谷氨酸合成酶(GOGAT)共同参与谷氨酸的合成,在氨同化和转化成有机氮化合物的代谢中起重要作用。

测定原理:

GDH催化NH4+α-酮戊二酸和NADH,生成谷氨酸和NAD+,引起340nm吸光度下降。通过测定340nm吸光度的下降速率,计算GDH活性。

组成:

产品名称

NM 003-50T/48S

Storage

提取液:液体

60ml

4℃

试剂一:液体

60ml

4℃

试剂二:粉剂

2

4℃

说明书

一份

自备仪器和用品:

紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、移液器、1ml石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

粗酶液提取:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500~10001的比例(建议500万细菌或细胞加入1ml提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

血清(浆)样品:直接检测。

测定步骤:

1、 分光光度计预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

2、 样本测定

1)在试剂二中加入25ml试剂一充分溶解混匀,置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴5min现配现用(配好后12h内用完)

20.05ml样本和0.95ml工作液于1ml比色皿中,混匀,加工作液的同时开始计时,在340 nm波长下记录20秒时的初始吸光度A1520秒时的吸光度A2,计算ΔA=A1-A2

GDH活性计算:

1、血清(浆)中GDH活力的计算:

单位的定义:每毫升血清(浆)每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。

GDHnmol/min/ml)=[ΔA×V反总÷ε×d×109]÷V÷T=643×ΔA

2、组织、细菌或细胞中GDH活力的计算:

1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。

GDHnmol/min /mg prot[ΔA×V反总÷ε×d×109]÷(V×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr

2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。

GDHnmol/min /g 鲜重)[ΔA×V反总÷ε×d×109]÷(W× V÷V样总) ÷T=643×ΔA÷W

3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。

GDHnmol/min /104 cell[ΔA×V反总÷ε×d×109]÷(V÷V样总×500) ÷T=1.286×ΔA

V反总:反应体系总体积,1×10-3 LεNADH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cmd:比色皿光径,1cmV样:加入样本体积,0.05 mlV样总:加入提取液体积,1 mlT:反应时间,5 minCpr:样本蛋白质浓度,mg/mlW:样本质量,g500:细菌或细胞总数,500万。

 

象形图
警示语
Class
警告声明
UNub
危险声明
Packing Group
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