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脲酶(UE)检测试剂盒(微量法 100T/48S)
NM010
Urease Activity Assay Kit (Microassay)
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NM010-100T/48S 100T/48S ¥780.00

脲酶(UreaseUE)测定试剂盒说明书

                                                  微量法100/48

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定                                             

测定意义:

UE能够水解尿素,产生氨和碳酸。UE活性与有机物质含量、全氮和速效氮含量呈正相关,反应了氮素状况。

测定原理:

利用靛酚蓝比色法测定脲酶水解尿素产生的NH3-N

组成:

产品名称

NM010-100T/48S

Storage

提取液:液体

60ml

4℃

试剂一:粉剂

1

4℃

试剂二:液体

22ml

4℃

试剂三A液:液体

1

4℃

试剂三B液:液体

1

4℃

试剂四:液体

2ml

4℃

说明书

一份

 

试剂一:粉剂×1瓶,临用前加入9ml蒸馏水,充分溶解待用,4℃保存;用不完的试剂4℃保存;

试剂三A液:液体×1支,4℃保存;试剂三B液:液体×1瓶,4℃保存;临用前将A液倒入B液中混合,待用;用不完的试剂4℃保存一周;

自备仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。

样本的前处理:

1、细菌、细胞或组织样品的制备:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500~10001的比例(建议500万细菌或细胞加入1ml提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2、血清(浆)样品:直接检测。

测定步骤:

1、 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至578nm,蒸馏水调零。

2、酶促反应

试剂名称

测定管

对照管

样本(μl

20

20

试剂一(μl

90

 

蒸馏水(μl

 

90

试剂二(μl

190

190

混匀,放入37℃水浴1h后,10000g 25℃离心10min,取上清液。

2、将上清液稀释10倍(取0.1ml上清液,加入0.9ml蒸馏水)。

3、测氨量(在微量石英比色皿或96孔板中加入下列试剂)

 

测定管

对照管

稀释后的上清液(μl

80

80

试剂三(μl

15

15

试剂四(μl

15

15

充分混匀,室温放置20min

蒸馏水(μl

90

90

混匀,于578nm处,蒸馏水调零,读吸光值A计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。

UE活力计算:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为y = 0.0915x +0.0373x为标准品浓度(μg/ml),y为吸光值A

1、血清(浆)UE活力的计算:

单位的定义:每ml血清(浆)每分钟产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。

UE活力(μg/min/ml(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V反总÷V÷T=27.32×(ΔA -0.0373)

单位的定义:每天每g土样中产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。

2、组织、细菌或细胞中1μg NH3-N活力的计算:

1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。

UE活力(μg/min/mg prot)=(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V反总÷(V×Cpr)÷T =27.32×(ΔA -0.0373) ÷Cpr

2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织每分钟产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。

UE活力(μg/min/ g 鲜重)=(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V反总÷(W× V÷V样总)÷T =27.32×(ΔA -0.0373) ÷W

3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。

UE活力(μg/min/104 cell)=(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V反总÷(500×V÷V样总) ÷T=0.0546×ΔA

10:稀释倍数;T:反应时间,60minV反总:反应体系总体积:0.3mlV样:加入反应体系中样本体积,0.02mlV样总:提取液体积,1mlCpr:样本蛋白质浓度,mg/mlW:样本质量, g500:细菌或细胞总数,500万。

b.96孔板测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为y = 0.04575x +0.0373x为标准品浓度(μg/ml),y为吸光值A

1、血清(浆)UE活力的计算:

单位的定义:每ml血清(浆)每分钟产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。

UE活力(μg/min/ml(ΔA-0.0373) ÷0.04575×10×V反总÷V÷T=54.64×(ΔA -0.0373)

单位的定义:每天每g土样中产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。

2、组织、细菌或细胞中1μg NH3-N活力的计算:

1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。

UE活力(μg/min/mg prot)=(ΔA-0.0373) ÷0.04575×10×V反总÷(V×Cpr)÷T =54.64×(ΔA -0.0373) ÷Cpr

2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织每分钟产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。

UE活力(μg/min/g 鲜重)=(ΔA-0.0373) ÷0.04575×10×V反总÷(W× V÷V样总)÷T =54.64×(ΔA -0.0373) ÷W

3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。

UE活力(μg/min/104 cell)=(ΔA-0.0373) ÷0.04575×10×V反总÷(500×V÷V样总) ÷T=0.1092×ΔA

10:稀释倍数;T:反应时间,60minV反总:反应体系总体积:0.3mlV样:加入反应体系中样本体积,0.02mlV样总:提取液体积,1mlCpr:样本蛋白质浓度,mg/mlW:样本质量, g500:细菌或细胞总数,500万。

 

 

象形图
警示语
Class
警告声明
UNub
危险声明
Packing Group
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