尿素氮(BUN)试剂盒说明书
分光光度法 50管/48样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
尿素是生物体内含氮化合物分解的终产物,在尿酶催化下分解转化成氨。血液尿素氮是肾功能的主要指标之一。
测定原理:
样本中尿素氮在氯化高铁一磷酸溶液中与二乙酰一肟和硫胺脲共煮,生成一种红色的二嗪化合物,其颜色的深浅与尿素氮含量成正比,采用二乙酰一肟法测定尿素氮含量。
组成:
产品名称
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NM021-50T/48S
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Storage
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试剂一:液体
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6ml
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4℃避光
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试剂二:液体
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6ml
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4℃避光
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说明书
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一份
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自备仪器和用品:
天平、研钵、常温离心机、可见分光光度计、1ml玻璃比色皿、恒温水浴锅。
样品处理:
1. 组织:按照质量(g):蒸馏水体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1ml蒸馏水)加入蒸馏水,匀浆后于25℃,10000g离心10min,取上清待测。
2. 细胞:按照细胞数量(104个):蒸馏水体积(ml )为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1ml蒸馏水),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后4℃,10000g离心10min,取上清置于冰上待测。
3. 血清或其它液体:直接检测。
测定操作:
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空白管
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测定管
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样品(μl)
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40
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H2O(μl)
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40
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试剂一(μl)
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100
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100
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试剂二(ml)
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1000
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1000
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混匀,沸水浴10min,冷却后,540nm下测定吸光值。△A=A测定-A空白。空白管只要做一管。
尿素氮含量计算:
标准条件下测定回归方程为y =2.048x + 0.0229,R2 = 0.9943;x为标准品浓度(mg/ml),y为吸光值。
1、按照血清(浆)或者细胞培养液体积计算
尿素氮含量(mg/ml)= (△A-0.0229)÷2.048=0.4882×(△A-0.0229)
2、按照样本质量计算
尿素氮含量mg/g鲜重)= (△A-0.0229)÷2.048×V样总÷W=0.4882×(△A-0.0229)÷W
3、按照蛋白浓度计算
尿素氮含量(mg/mg prot)= (△A-0.0229)÷2.048÷Cpr=0.4882×(△A-0.0229) ÷Cpr
V样总:加入提取液体积,1 ml; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。