原果胶含量试剂盒说明书
分光光度法 50管/ 24样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
果胶是植物细胞壁主要组成成分之一，分为水溶性果胶和不溶性果胶，即原果胶。因其具有良好的乳化、增稠和凝胶作用，在食品、纺织、印染、烟草、冶金等领域具有较广泛的应用。
测定原理：
原果胶在稀酸中水解为可溶性果胶，并进一步转化为半乳糖醛酸，产物在强酸中与咔唑缩合生成紫红色化合物，在530 nm处有特征吸收峰。
试剂的组成和配制：
|
产品名称
|
PCS014-50T/24S
|
Storage
|
|
提取液：液体
|
100ml
|
4℃
|
|
提取液：液体
|
50ml
|
4℃
|
|
标准品：液体
|
1ml
|
4℃
|
|
试剂一：浓硫酸
|
自备
|
--
|
|
试剂二：液体
|
5ml
|
4℃
|
|
试剂三：液体
|
5ml
|
4℃避光
|
|
说明书
|
一份
|
自备仪器和用品：
天平、研钵、常温离心机、可见分光光度计、水浴锅、1ml玻璃比色皿、浓硫酸和蒸馏水。
样品处理：
将组织样品捣碎，按照样品质量(g)和提取液一体积(ml)为1: 20的比列（建议取约0.05g样品，加入1ml提取液一），置于90℃恒温水浴锅中浸提30min，取出冷却后于5000g、 25℃离心10min，去掉上清，沉淀中再加入1ml提取液一重复操作一次，离心后去上清，沉淀中加入1ml提取液二，置于90℃恒温水浴锅中水解1h，取出冷却后于8000g、25℃离心15min，取上清液待测。
测定步骤：
|
|
空白管
|
标准管
|
对照管
|
测定管
|
|
样本（μl）
|
|
|
100
|
100
|
|
标准品（μl）
|
|
100
|
|
|
|
浓硫酸（μl）
|
600
|
600
|
600
|
600
|
|
混匀、90℃放置10min，取出后冷却
|
|
试剂二（μl）
|
|
|
100
|
|
|
试剂三（μl）
|
100
|
100
|
|
100
|
|
混匀，25℃静置30min
|
|
蒸馏水（μl）
|
300
|
200
|
200
|
200
|
|
充分混匀，置于1ml玻璃比色皿中，测定530nm处吸光值，分别记为A1、A2、A3和A4。△A1=A2-A1，△A2=A4-A3。
|
计算公式：
原果胶含量(mg /g 鲜重)= (C标准×V标) ×△A2÷△A1÷(W÷V样总) =0.25×△A2÷△A1÷W
C标准：标准品浓度，0.25mg/ml；V标：反应体系中加入标准品体积，0.1ml； V样总：加入提取液体积，1ml； W：样本鲜重，g。
注意事项：
1、空白管和标准管只需测定一次。
2、浓硫酸具有强腐蚀性，操作时需特别注意，90℃加热取出后冷却再打开盖子，以防液体飞溅烧伤。
3、若吸光值超过1，可将样本提取液进行适当稀释再进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。
最低检出限为10μg/g。
