原果胶含量试剂盒说明书
微量法100T/48S
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
果胶是植物细胞壁主要组成成分之一，分为水溶性果胶和不溶性果胶，即原果胶。因其具有良好的乳化、增稠和凝胶作用，在食品、纺织、印染、烟草、冶金等领域具有较广泛的应用。
测定原理：
原果胶在稀酸中水解为可溶性果胶，并进一步转化为半乳糖醛酸，产物在强酸中与咔唑缩合生成紫红色化合物，在530 nm处有特征吸收峰。
试剂的组成和配制：
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产品名称
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PCS015-100T/48S
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Storage
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提取液：液体
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100ml×2
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4℃
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提取液：液体
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100ml
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4℃
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标准品：液体
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1ml
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4℃
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试剂一：浓硫酸
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自备
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--
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试剂二：液体
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2ml
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4℃
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试剂三：液体
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3ml
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4℃避光
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说明书
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一份
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自备仪器和用品：
天平、研钵、常温离心机、水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、浓硫酸和蒸馏水。
样品处理：
将组织样品捣碎，按照样品质量(g)和提取液一体积(ml)为1: 20的比列（建议取约0.05g样品，加入1ml提取液一），置于90℃恒温水浴锅中浸提30min，取出冷却后于5000g、 25℃离心10min，去掉上清，沉淀中再加入1ml提取液一重复操作一次，离心后去上清，沉淀中加入1ml提取液二，置于90℃恒温水浴锅中水解1h，取出冷却后于8000g、25℃离心15min，取上清液待测。
测定操作表：
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空白管
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标准管
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对照管
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测定管
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样本（μl）
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30
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30
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标准品（μl）
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30
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浓硫酸（μl）
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180
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180
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180
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180
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混匀、90℃水浴10min，取出后冷却
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试剂二（μl）
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30
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试剂三（μl）
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30
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30
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30
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混匀，25℃静置30min
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蒸馏水（μl）
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90
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60
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60
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60
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充分混匀，取200μl置于微量石英比色皿/96孔板中，测定530nm处吸光值，分别记为A1、A2、A3和A4。△A1=A2-A1，△A2=A4-A3
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计算公式：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
原果胶含量(mg /g 鲜重)= (C标准×V标) ×△A2÷△A1÷(W÷V样总) = 0.25×△A2÷△A1÷W
C标准：标准品浓度，0.25mg/ml；V标：反应体系中加入标准品体积，0.02ml； V样总：加入提取液体积，1ml；W：样本鲜重，g。
b.用96孔板测定的计算公式如下
原果胶含量(mg /g 鲜重)= (C标准×V标) ×△A2÷△A1÷(W÷V样总) =0.25×△A2÷△A1÷W
C标准：标准品浓度，0.25mg/ml；V标：反应体系中加入标准品体积，0.02ml； V样总：加入提取液体积，1ml； W：样本鲜重，g。
注意事项：
1、空白管和标准管只需测定一次。
2、浓硫酸具有强腐蚀性，操作时需特别注意，90℃加热取出后冷却再打开盖子，以防液体飞溅烧伤。
3、若吸光值超过1，可将样本提取液进行适当稀释再进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。
4、最低检出限为10μg/g。
