18936629630 工作日:09:00 am -17:30 pm

— 为广大用户提供满意的服务 —

线粒体柠檬酸(MCA)检测试剂盒(微量法 100T/96S)
KC010
Mitochondrion Citric Acid Assay Kit (Microassay)
货号 规格 目录价 会员价 库存 数量 购买
KC010-100T/96S 1盒 ¥4800.00

线粒体柠檬酸(Mitochondrion citric acid, MCA)含量试剂盒说明书

                                            微量法 100/96

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定                                             

测定意义:

MCA是线粒体三羧酸循环的第一个中间产物,由柠檬酸合酶催化乙酰CoA与草酰乙酸合成,其含量是三羧酸循环强度的主要指标之一。

配合测定丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性、乙酰CoA含量、柠檬酸合酶活性和MCA含量,其中(1)丙酮酸含量和丙酮酸脱氢酶活性变化可以反映糖酵解进行程度,(2)综合分析丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性和乙酰CoA含量变化可以反映脂肪酸β-氧化途径提供的乙酰CoA情况,(3)乙酰CoA含量、柠檬酸合酶活性和MCA含量变化可以反映三羧酸循环进行状况。

测定原理:

MCA在柠檬酸裂解酶的作用下,生成α-酮酸(草酰乙酸);在弱酸性条件下,α-酮酸进一步与苯肼反应,生成相应的α-酮酸苯腙;α-酮酸苯腙在330nm处有吸收峰,该波长下吸光度的变化程度可反映出MCA的含量。

组成:

产品名称

KC010-100T/96S

Storage

酸性提取液:液体

100ml

4℃

碱性提取液:液体

100ml

4℃

试剂一:液体

6ml

4℃

试剂二:液体

2ml

4℃

试剂三:粉剂

1

4℃

标准液:液体

1ml

4℃

说明书

一份

 

试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入6ml蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂4℃保存;

标准液:液体1ml×1支,10μmol/ml柠檬酸标准液,4℃保存。

自备仪器和用品:

分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液枪、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、研钵、蒸馏水。

线粒体中柠檬酸提取:

0.05~0.1g样品(建议称0.1g样本),加入0.5ml酸性提取液,冰上充分研磨,600g/min 4℃离心5min;取上清至另一EP管中,11000g/min 4℃离心10min,弃上清(取300μl该上清液和300μl碱性提取液中和后可用于细胞质CA含量测定);沉淀即线粒体,向沉淀中加入0.5ml酸性提取液,充分悬浮溶解,超声波破碎(功率20%,超声3秒,间隔10秒,重复30次),取此溶液300μl300μl碱性提取液中和,混匀,置冰上待测(不可用于蛋白质含量测定)。

测定步骤:

1、分光光度计或酶标仪预热30 min以上,调节波长到330nm,蒸馏水调零。

2、试剂一、二和三37℃预热10min

3、样本测定:

空白管和标准管只需要各做一个。

试剂名称(μl)

空白管

标准管

测定管

试剂一

60

60

60

蒸馏水

60

 

 

标准液

 

60

 

样本

 

 

60

试剂二

20

20

20

试剂三

60

60

60

充分混匀,330nm立即测定初始吸光值A137℃孵育30min后的吸光值A2ΔA=A2 –A1

柠檬酸含量计算:

1)按蛋白浓度计算

柠檬酸含量(μmol/mg prot)=[C标准管×(ΔA测定管-ΔA空白管)÷(ΔA标准管-ΔA空白管) ×VV÷Cpr=10×(ΔA测定管-ΔA空白管)÷(ΔA标准管-ΔA空白管)÷Cpr

蛋白质含量需要另外测定。

2)按样本鲜重计算

柠檬酸含量(μ mol/g鲜重)=[C标准管×(ΔA测定管-ΔA空白管)÷(ΔA标准管-ΔA空白管) ×VW×V÷V样总)=10×(ΔA测定管-ΔA空白管)÷(ΔA标准管-ΔA空白管)÷W

C标准管:标准液浓度,10μmol/mlV样:加入反应体系中样本体积:0.06mlV样总:加入提取液体积:1mlCpr:样品蛋白浓度,mg/mlW:样本质量,g

注意:最低检测限为10nmol/mg prot1μmol/g鲜重。

 

 

象形图
警示语
Class
警告声明
UNub
危险声明
Packing Group
KC010 线粒体柠檬酸(MCA)检测试剂盒(微量法 100T96S).pdf 下载

相关产品

乙酰辅酶A含量检测试剂盒(微量法100T/96S)
KC024 100T/96S
乳酸含量(LA)检测试剂盒(微量法100T/48S)
KC023 100T/48S
乳酸含量(LA)检测试剂盒(分光光度法50T/24S)
KC022 50T/24S
顺乌头酸酶检测试剂盒(微量法 100T/96S)
KC019 100T/96S
顺乌头酸酶检测试剂盒(分光光度法 50T/48S)
KC018 50T/48S
羟甲基戊二酰辅酶A合成酶(HMGCS)检测试剂盒(微量法 100T/96S)
KC017 1盒
羟甲基戊二酰辅酶A合成酶(HMGCS)检测试剂盒(分光光度50T/48S)
KC016 1盒
线粒体苹果酸脱氢酶(MDHm)检测试剂盒(微量法 100T/96S)
KC015 1盒
线粒体苹果酸脱氢酶(MDHm)检测试剂盒(分光光度50T/48S)
KC014 1盒
甲基柠檬酸合酶(MCS)检测试剂盒(微量法 100T/96S)
KC013 1盒
甲基柠檬酸合酶(MCS)检测试剂盒(分光光度50T/48S)
KC012 1盒
线粒体柠檬酸(MCA)检测试剂盒(微量法 100T/96S)
KC010 1盒
线粒体柠檬酸(MCA)检测试剂盒(分光光度法 50T/48S)
KC009 1盒
线粒体异柠檬酸脱氢酶检测试剂盒(微量法100T/96S)
KC008 100T/96S
线粒体异柠檬酸脱氢酶检测试剂盒(分光光度法50T/48S)
KC007 50T/48S
琥珀酸脱氢酶(SDH)检测试剂盒(分光光度法50T/48S)
KC006 50T/48S
琥珀酸脱氢酶(SDH)检测试剂盒(微量法100T/96S)
KC005 100T/96S
丙酮酸脱氢酶(PDH)检测试剂盒(微量法100T/96S)
KC004 100T/96S
丙酮酸脱氢酶(PDH)检测试剂盒(分光光度法50T/48S)
KC003 50T/48S
α-酮戊二酸脱氢酶(α-KGDH)检测试剂盒(微量法 100T/96S)
KC002 100T/96S