可溶性淀粉合成酶（Soluble starch synthase，SSS）
试剂盒说明书
分光光度法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
SSS（EC 2.4.1.21）通常以游离态存在于质体基质中，催化淀粉链延长，主要负责支链淀粉的合成。
测定原理：
SSS催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应，将葡萄糖分子转移到淀粉引物上，同时生成ADP，在反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化NADP+还原为NADPH，NADPH生成量与前一步反应中ADP生成量呈正比，340nm下测定NADPH增加量即可计算SSS活性。
组成：
|
产品名称
|
SA005-25T/24S
|
SA005-50T/48S
|
Storage
|
|
提取液：液体
|
30ml
|
60ml
|
4℃
|
|
试剂一：液体
|
25ml
|
50ml
|
4℃
|
|
试剂二：粉剂
|
1瓶
|
1瓶
|
4℃
|
|
试剂三：粉剂
|
1瓶
|
1瓶
|
4℃
|
|
试剂四：粉剂
|
1瓶
|
1瓶
|
4℃
|
|
试剂五：液体
|
1瓶
|
1瓶
|
-20℃
|
|
试剂六：粉剂
|
1瓶
|
1瓶
|
-20℃
|
|
说明书
|
1份
|
SA005-25T/24S试剂二临用前加入7ml试剂一充分混匀备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
SA005-25T/24S试剂三临用前加入4ml试剂一充分混匀备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
SA005-25T/24S试剂四临用前加入9ml试剂一充分混匀备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
SA005-25T/24S试剂五临用前加入0.5ml蒸馏水，充分溶解备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
SA005-25T/24S试剂六临用前加入0.5ml蒸馏水，充分溶解备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
SA005-50T/48S试剂二临用前加入14ml试剂一充分混匀备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
SA005-50T/48S试剂三临用前加入8ml试剂一充分混匀备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
SA005-50T/48S试剂四临用前加入17ml试剂一充分混匀备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
SA005-50T/48S试剂五临用前加入1ml蒸馏水，充分溶解备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
SA005-50T/48S试剂六临用前加入1ml蒸馏水，充分溶解备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
自备仪器和用品：
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、移液器、1 ml石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
粗酶液制备：
按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、在EP管中按顺序加入下列试剂
|
试剂名称（μl）
|
测定管
|
|
样本
|
150
|
|
试剂二
|
270
|
混匀，30℃保温20 min，置沸水浴中1 min（盖紧，防止水分散失），冰浴冷却
混匀，30℃保温30 min，置沸水浴中1 min（盖紧，防止水分散失），冰浴冷却，10000g 4℃离心10min，取上清液（如果一次性测定样本较多，可将试剂四、五和六按比例配成混合液）
|
上清液
|
450
|
|
试剂四
|
300
|
|
试剂五
|
15
|
|
试剂六
|
15
|
混匀后立即340 nm波长下记录初始吸光度A1和 2min后的吸光度A2，计算ΔA=A2-A1。
注意：试剂二如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混匀。
SSS活性计算：
1、按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
GBSS（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V样) ÷T×稀释倍数
=529×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
2、按照样本鲜重计算
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
GBSS活性（nmol/min /g 鲜重）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷（V样÷V样总×W）÷T×稀释倍数
=529×ΔA÷W
V 反总：反应体系总体积，7.8×10-4 L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.15 ml；V样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，2 min；稀释倍数：1.9；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量。
