α-淀粉酶（α-amylase，α-AL）试剂盒
（ 微量法100T/48S）
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
淀粉水解酶，包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-AL (EC 3.2.1.1)随机催化淀粉中α-1,4-糖苷键水解，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉的粘度降低，因此又称为液化酶。
测定原理：
淀粉水解酶催化淀粉水解生成还原糖，还原糖还原3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质，在540 nm有吸收峰；通过测定540 nm吸光度增加速率，计算淀粉酶活性。α-AL耐热，但是β-淀粉酶可在70℃钝化15min。因此粗酶液经过70℃钝化15min，就只有α-AL能够催化淀粉水解。
组成：
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组分名称
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SA010-100T/48S
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Storage
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试剂一：液体
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15ml
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RT
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试剂二：液体
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7.5ml
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4℃
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说明书
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一份
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试剂一：液体15ml×1瓶，室温保存。若有黄色晶体析出，可90℃加热溶解后再用。
试剂二：液体7.5ml×1瓶，4℃保存。若有沉淀析出，可70℃加热溶解后使用。
自备仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵和蒸馏水。
粗酶液提取:
组织：称取0.1~0.2g样本（建议称取约0.1g样本），加1 ml蒸馏水匀浆；将匀浆倒入离心管中，在室温下放置提取15min，每隔5min振荡1次，使其充分提取；3000g，25℃离心10min，吸取上清液并且加蒸馏水定容至10 ml，摇匀，即为淀粉酶原液。
血清（浆）：直接检测。
操作步骤和加样表（在EP管中依次加入下列试剂）：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长到540 nm，蒸馏水调零。
2、试剂一和试剂二40℃预热10min。
3、测定步骤：
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试剂（μl）
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对照管
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测定管
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α 淀粉酶原液
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75
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75
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70℃水浴15min左右，流水冷却。
在40℃恒温水浴中准确保温5min
混匀，95度水浴5min，冷却，取200μL 至微量石英比色皿或96孔板中，540nm处读取吸光值，计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管需设一个对照管。
α-淀粉酶活性计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、标准条件下测定回归曲线为y=3.7215x -0.1778； x为标准品浓度（mg/ml），y为吸光值。
2、α 淀粉酶活性
（1）按照样本质量计算
单位定义：每g组织每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。
α 淀粉酶活性(mg/min/g鲜重)=[(ΔA＋0.1778)÷3.7215×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T=1.075×(ΔA＋0.1778)÷W
（2）按照蛋白质含量计算
单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活性单位。
α 淀粉酶活性(mg/min/mg prot)= [(ΔA＋0.1778)÷3.7215×V反总]÷（V样×Cpr）÷T=0.1075×(ΔA＋0.1778) ÷Cpr
（3）血清（浆）样本中α 淀粉酶活性计算
单位定义：每ml血清（浆）每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活性单位。
α 淀粉酶活性(mg/min/ml)= [(ΔA＋0.1778)÷3.7215×V反总]÷V样÷T=0.1075×(ΔA＋0.1778)
反总：反应体系总体积，0.15ml；V样：加入反应体系中样本体积，0.075 ml；V样总：提取液总体积，10 ml； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；T：反应时间，5min。
b.用96孔板测定的计算公式如下
1、标准条件下测定回归曲线为y=2.481x -0.1778； x为标准品浓度（mg/ml），y为吸光值。
2、α 淀粉酶活性
（1）按照样本质量计算
单位定义：每g组织每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。
α 淀粉酶活性(mg/min/g鲜重)=[(ΔA＋0.1778)÷2.481×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T=1.612×(ΔA＋0.1778)÷W
（2）按照蛋白质含量计算
单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活性单位。
α 淀粉酶活性（mg/min/mg prot）=[(ΔA＋0.1778)÷2.481×V反总]÷（V样×Cpr）÷T =0.1612×(ΔA＋0.1778) ÷Cpr
（3）血清（浆）样本中α 淀粉酶活性计算
单位定义：每ml血清（浆）每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活性单位。
α 淀粉酶活性(mg/min/ml)= [(ΔA＋0.1778)÷2.481×V反总]÷V样÷T=0.1612×(ΔA＋0.1778)
V反总：反应体系总体积，0.15ml；V样：加入反应体系中样本体积，0.075 ml；V样总：提取液总体积，10 ml； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；T：反应时间，5min。
