淀粉磷酸化酶（Starch phosphorylase，SP）试剂盒说明书
分光光度法50管/48样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
淀粉磷酸化酶（Starch Phosphorylase，SP）是淀粉代谢过程唯一的可逆反应酶，既可催化淀粉的合成，也可催化淀粉的分解。
在高等植物中，淀粉磷酸化酶（合成方向）主要存在于质体中，负责延长淀粉的 α-1,4-葡萄糖链的非还原末端；淀粉磷酸化酶（分解方向）主要存在于细胞质基质中，催化淀粉中的α-1,4-糖苷键磷酸解产生葡萄糖-1-磷酸，负责葡萄糖链的磷酸解，是淀粉代谢过程中的关键酶。
在植物体中，淀粉磷酸化酶分解方向的底物无机磷浓度比合成方向的底物葡萄糖-1-磷酸浓度几乎高了两个数量级，一般认为淀粉磷酸化酶只催化淀粉的分解，因此，分解方向的淀粉磷酸化酶具有重要测定意义。
测定原理：
淀粉磷酸化酶催化淀粉中的α-1,4-糖苷键与无机磷反应产生葡萄糖-1-磷酸，葡萄糖-1-磷酸在磷酸葡萄糖变位酶的作用下产生葡萄糖-6-磷酸，并在6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化下还原NADP+产生NADPH，使340nm下吸光值增加。
组成：
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产品名称
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SA021-50T/48S
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Storage
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提取液：液体
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60ml
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4℃
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试剂一：液体
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50ml
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4℃
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试剂二：粉剂
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1支
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4℃
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试剂三：粉剂
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1支
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4℃
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说明书
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一份
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试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入3ml水溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存；
试剂三：粉剂×1支，-20℃保存；临用前加入3ml水溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存。
自备仪器和用品：
紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1ml石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
样本的前处理：
1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃，离心10min，取上清待测。
2、细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1ml提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零；
2、工作液的配制：临用前将试剂一、试剂二、试剂三按照每个样本850μL:50μL:50μL的比例混合，临用前配制，半小时内使用。
3、在1ml石英比色皿中加入50μL样本和950μL工作液，立即混匀，记录340nm处1min时的吸光值A1和6min时的吸光值A2，计算ΔA=A2-A1。
SP活力单位的计算：
（1）按样本蛋白浓度计算
单位定义：每mg组织蛋白每分钟产生1nmolNADPH定义为一个酶活力单位。
SP（nmol/min/mgprot）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr)÷T
=943×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算
单位定义：每g组织每分钟产生1nmolNADPH定义为一个酶活力单位。
SP（nmol/min/g鲜重）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(W×V样÷V样总)÷T
=943×ΔA÷W
（3）按样本细胞计算
单位定义：每万个细胞每分钟产生1nmolNADPH定义为一个酶活力单位。
SP（nmol/min/104cell）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T
=1.886×ΔA
V反总：反应体系总体积，1×10-3L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.05ml；V样总：加入提取液体积，1ml；T：反应时间，5min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；细胞数量，500万。
