土壤α-葡萄糖苷酶(Solid-α-Glucosidase,S-α-GC)试剂盒说明书
分光光度法 50管/24样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
S-α-GC能够催化水解芳基或烃基与糖基原子团之间的糖苷键生成葡萄糖,是纤维素分解酶系中重要组成成分之一,在土壤微生物的糖类代谢方面具有重要生理功能。
测定原理:
S-α-GC能够催化对-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚,后者在400nm有特征光吸收。
试剂组成和配制:
产品名称
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SSQ025-50T/24S
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Storage
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试剂一:甲苯
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5ml(自备)
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4℃
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试剂二:粉剂
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2瓶
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-20℃
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试剂三:液体
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25ml
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4℃
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试剂四:液体
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50ml
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4℃
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说明书
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一份
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试剂二:粉剂×2瓶,-20℃保存;临用前每瓶加入6ml蒸馏水,充分溶解备用,用不完的试剂仍-20℃保存。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1ml玻璃比色皿、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。
样品处理:
新鲜土样自然风干或37度烘箱风干,过30~50目筛。
测定步骤:
试剂名称
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测定管
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对照管
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风干土样(g)
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0.05
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0.05
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试剂一(μl)
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25
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25
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室温振荡混匀15min
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90℃振荡混匀15min
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试剂二(μl)
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400
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蒸馏水(μl)
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400
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试剂三(μl)
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500
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500
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混匀, 37℃振荡反应1h后,立即90℃水浴5min(盖紧,防止水分散失),流水冷却10000g 25℃离心10min,取上清液
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上清液(μl)
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500
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500
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试剂四(μl)
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1000
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1000
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充分混匀,室温静置2min后,400nm处蒸馏水调零,测定吸光值A,计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。
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S-α-GC活力计算:
标准条件下测定的回归方程为y = 0.0032x -0.0027;x为标准品浓度(μmol/L),y为吸光值。
单位的定义:每天每g土样中产生1 μmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
S-α-GC活力(μmol/d /g 土样)= (ΔA+0.0027) ÷0.0032×V反总÷W÷T =138.7×(ΔA+0.0027)
T:反应时间,1h=1/24d; V反总:反应体系总体积:9.25×10-4 L;W:样本质量,0.05g。