土壤碱性木聚糖酶(Soil Basic Xylanase,S-BAX)测定试剂盒说明书
微量法100T/48S
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生,能催化水解木聚糖,也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶,可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及β-葡聚糖,降低酿造中物料的粘度,促进有效物质的释放,以及降低饲料中的非淀粉多糖,促进营养物质的吸收利用,因而广泛的应用于酿造和饲料工业中,BAX一般分离自最适生长pH为9 -11的微生物。
测定原理:
BAX在碱性环境中催化木聚糖降解成还原性寡糖和单糖,在沸水浴条件下进一步与3,5-二硝基水杨酸发生显色反应,在540nm处有特征吸收峰,反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比,通过测定反应液在540nm吸光值增加速率,可计算BAX活力。
组成:
产品名称
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SSQ095-100T/48S
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Storage
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缓冲液:液体
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10ml
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4℃
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试剂一:液体
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3ml
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4℃避光
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试剂二:液体
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10ml
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4℃避光
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说明书
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一份
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自备仪器和用品:
天平、常温离心机、震荡仪、恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板。
样品处理:
新鲜土样风干,过30-50目筛。
测定操作表:
1、 分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长至540nm。
2、 操作表
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对照管
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测定管
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土样(g)
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0.02
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0.02
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缓冲液(μl)
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150
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100
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试剂一(μl)
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50
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混匀,50℃震荡反应30min,立即90℃水浴10min,8000g,25℃离心10min,取上清100μl
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试剂二(μl)
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100
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100
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混匀,90℃水浴中显色5min,取180μl于微量石英比色皿/96孔板测定540nm处吸光值A,分别记为A对照管、A测定管,△A=A测定管-A对照管。
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S-BAX计算公式:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:y = 2.8432x - 0.0293,R2 = 0.9985
酶活定义:50℃,pH9.0条件下,每克土壤每天分解木聚糖产生1μmol 还原糖所需的酶量为一个酶活单位。
S-BAX活力(μmol/d /g 土样)=(△A+0.0293)÷ 2.8432×V反总×103÷ W÷T÷ 150
= 16.88×(A540+0.0058)÷ W
V反总:反应总体积,0.15ml;T:反应时间,1/48d;1000:1mmol/L =103μmol/L;150:木糖分子量。
b.用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y = 1.4216x - 0.0293,R2 = 0.9985
酶活定义:50℃,pH9.0条件下,每克土壤每天分解木聚糖产生1μmol 还原糖所需的酶量为一个酶活单位。
S-BAX活力(μmol/d /g土样)=(△A+0.0293)÷ 1.4216×V反总×103÷ W÷T÷ 150
= 33.76×(A540+0.0058)÷ W
V反总:反应总体积,0.15ml;T:反应时间,1/48d;1000:1mmol/L =103μmol/L;150:木糖分子量。
注意事项:
1. 保证震荡反应30min,使酶与底物充分接触。
2. 注意90℃水浴防止爆开,以免改变反应体系。