土壤β-木糖苷酶(Solid-β- xylosidase, S-β-XYS)测定试剂盒说明书
分光光度法 50管/24样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、细菌和真菌等生物体,是催化木聚糖类半纤维素降解的关键酶,产物木糖可作为碳源应用于微生物发酵。另外,β-木糖苷酶还可以作为生物漂白剂应用于造纸工业,比传统的漂白法环保,具有广泛的应用价值。
测定原理:
S-β-XYS催化对硝基苯酚-β-D-木糖苷产生对硝基苯酚,对硝基苯酚在405nm处有特征吸收峰,测定405nm光吸收增加速率,可计算S-β-XYS活性。
组成:
产品名称
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SSQ102-50T/24S
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Storage
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提取液:液体
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50ml
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4℃
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试剂一:液体
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2ml
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4℃避光
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试剂二:液体
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20ml
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4℃
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试剂三:液体
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20ml
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4℃
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说明书
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一份
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自备仪器和用品:
天平、低温离心机、可见分光光度计、1 ml玻璃比色皿和蒸馏水。
粗酶液提取:
约0.1g鲜土或风干土样,加入1ml提取液进行冰浴匀浆,室温振荡提取30min,然后10000g,4℃,离心10min,取上清待测。
测定操作表:
1、 分光光度计预热30min,调节波长至405nm。
2、 操作表
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对照管
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测定管
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样本(μl)
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200
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200
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试剂一(μl)
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50
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试剂二(μl)
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400
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350
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混匀,45℃水浴20min
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试剂三(μl)
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400
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400
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混匀,静置5min,405nm处测定吸光值A,计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。
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β-木糖苷酶活性:
标准曲线:y=13.226x+0.0011,R2=0.9998;x为标准品浓度(μmol/ml),y为吸光值ΔA。
酶活定义:每克土样每天催化产生1μmol对硝基苯酚的酶量为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性(μmol/d /g 土样)=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V反总÷(V样÷V样总×W)÷T
=16.33×(ΔA-0.0011)÷W
V样总:加入提取液体积,1ml; V反总:反应总体积,0.6ml;V样:反应中样品体积,0.2ml; W:样品质量,g;T:反应时间,20min=1/72d;
ΔA控制在0.01-2范围内,若ΔA大于2,可适当减小样本量。
标准曲线线性范围为:0.01μmol/ml-0.5μmol/ml。