土壤酸性木聚糖酶(Soil Acidic Xylanase,S-ACX)测定
试剂盒说明书
分光光度法 50管/24样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生,能催化水解木聚糖,也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶,可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及β-葡聚糖,降低酿造中物料的粘度,促进有效物质的释放,以及降低饲料中的非淀粉多糖,促进营养物质的吸收利用,因而广泛的应用于酿造和饲料工业中,ACX一般分离自耐酸的真菌,细菌及部分霉菌。
测定原理:
ACX在酸性环境下能将木聚糖降解成还原性寡糖和单糖,进一步在沸水浴条件下与3,5-二硝基水杨酸发生显色反应,在540nm处有特征吸收峰,反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比,通过测定反应液在540nm吸光值增加速率,可计算ACX活力。
组成:
产品名称
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SSQ096-50T/24S
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Storage
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缓冲液:液体
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20ml
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4℃
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试剂一:液体
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5ml
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4℃避光
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试剂二:液体
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25ml
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4℃避光
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说明书
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一份
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试剂三:粉剂×1 瓶,-20 ℃保存,用时加入 4ml 蒸馏水,混匀,用不完的试剂 4℃保存一周;
试剂四:粉剂×1 瓶,4 ℃保存,用时加入 4ml 蒸馏水,混匀,用不完的试剂 4℃保存一周;
自备仪器和用品:
天平、常温离心机、震荡仪、恒温水浴锅,可见分光光度计、1 ml玻璃比色皿。
样品处理:
新鲜土样风干,过30-50目筛。
测定操作表:
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对照管
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测定管
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土样(g)
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0.1
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0.1
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缓冲液(μl)
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600
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400
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试剂一(μl)
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200
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混匀,50℃震荡反应30min,立即90℃水浴10min,8000g,25℃离心10min,取上清500μl
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试剂二(μl)
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500
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500
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混匀,90℃水浴中显色5min,1ml玻璃比色皿,对照管调零,测定A540。
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S-ACX计算公式:
标准曲线:y = 2.5554x - 0.002 ,R2 = 0.9983
酶活定义:50℃,pH4.8条件下,每克土壤每天分解木聚糖产生1μmol 还原糖所需的酶量为一个酶活单位。
S-ACX活力(μmol/d/g 土样)=(A540+0.002)÷ 2.5554×V反总×103÷ W÷T÷ 150
= 75.14×(A540+0.002)÷ W
V反总:反应总体积,0.6ml;T:反应时间,1/48d;1000:1mmol/L =103μmol/L;150:木糖分子量。
注意事项:
1. 保证震荡反应30min,使酶与底物充分接触。
2. 注意90℃水浴防止爆开,以免改变反应体系。