土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶
（Solid-N-acetyl-β-D-glucosidase, S-NAG）试剂盒说明书
分光光度法 50管/24样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
S-NAG是溶酶体中的一种酸性水解酶，由土壤微生物分泌。S-NAG活性变化与机体某些病理状态密切相关。
测定原理：
S-NAG分解β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算NAG活性。
试剂组成和配制：
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产品名称
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SSQ030-50T/24S
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Storage
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试剂一：甲苯
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5ml（自备）
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4℃
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试剂二：粉剂
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2瓶
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-20℃
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试剂三：液体
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25ml
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4℃
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试剂四：液体
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50ml
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4℃
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说明书
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一份
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试剂二：粉剂×2瓶，-20℃保存；临用前每瓶加入6ml蒸馏水，充分溶解备用，用不完的试剂仍-20℃保存。
自备仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1ml玻璃比色皿、甲苯（不允许快递）和蒸馏水。
样品处理：
新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，过30~50目筛。
测定步骤：
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试剂名称
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测定管
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对照管
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风干土样（g）
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0.05
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0.05
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试剂一（μl）
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25
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25
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室温振荡混匀15min
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90℃振荡混匀15min
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试剂二（μl）
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400
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蒸馏水（μl）
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400
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试剂三（μl）
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500
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500
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混匀， 37℃振荡反应1h后，立即90℃水浴5min（盖紧，防止水分散失），流水冷却10000g 25℃离心10min，取上清液。
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上清液（μl）
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500
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500
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试剂四（μl）
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1000
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1000
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充分混匀，室温静置2min后，400nm处蒸馏水调零，测定吸光值A，计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。
S-NAG活力计算：
标准条件下测定的回归方程为y = 0.00645x -0.0054；x为标准品浓度（μmol/L），y为吸光值。
单位的定义：每天每g土样中产生1 μmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
S-NAG活力（μmol/d/g 土样）＝ (ΔA+0.0054) ÷0.00645×V反总÷W÷T =68.84×(ΔA+0.0054)
T：反应时间，1h=1/24d； V反总：反应体系总体积：9.25×10-4 L；W：样本质量，0.05g。
