土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶
（Solid-N-acetyl-β-D-glucosidase, S-NAG）试剂盒说明书
微量法 100管/48样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
S-NAG是溶酶体中的一种酸性水解酶，由土壤微生物分泌。S-NAG活性变化与机体某些病理状态密切相关。
测定原理：
S-NAG分解β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算NAG活性。
试剂组成和配制：
|
产品名称
|
SSQ031-100T/48S
|
Storage
|
|
试剂一：甲苯
|
5ml（自备）
|
4℃
|
|
试剂二：粉剂
|
1瓶
|
-20℃
|
|
试剂三：液体
|
20ml
|
4℃
|
|
试剂四：液体
|
15ml
|
4℃
|
|
说明书
|
一份
|
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入10ml蒸馏水，充分溶解备用，用不完的试剂仍-20℃保存。
自备仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、甲苯（不允许快递）和蒸馏水。
样品处理：
新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，过30~50目筛。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至400nm，蒸馏水调零。
2、加样表：
|
试剂名称
|
测定管
|
对照管
|
|
风干土样（g）
|
0.02
|
0.02
|
|
试剂一（μl）
|
10
|
10
|
|
|
室温振荡混匀15min
|
90℃振荡混匀15min
|
|
试剂二（μl）
|
130
|
|
|
蒸馏水
|
|
130
|
|
试剂三（μl）
|
160
|
160
|
混匀， 37℃振荡反应1h后，90℃水浴5min（盖紧，防止水分散失），流水冷却，
10000g 25℃离心10min，取上清液（在EP管或96孔板中加入下列试剂）；
|
上清液（μl）
|
70
|
70
|
|
试剂四（μl）
|
130
|
130
|
充分混匀，室温静置2min后， 400nm处测定吸光值A，计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。
S-NAG活力计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 0.00645x -0.0054；x为标准品浓度（μmol/L），y为吸光值。
单位的定义：每天每g土样中产生1 μmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
S-NAG活力（μmol/d/g 土样）＝ (ΔA+0.0054) ÷0.00645×V反总÷W÷T =55.81×(ΔA+0.0054)
T：反应时间，1h=1/24d； V反总：反应体系总体积：3×10-4 L；W：样本质量，0.02g。
b.用96孔板测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 0.0043x -0.0054；x为标准品浓度（μmol/L），y为吸光值。
单位的定义：每天每g土样中产生1 μmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
S-NAG活力（μmol/d/g 土样）＝ (ΔA+0.0054) ÷0.0043×V反总÷W÷T =83.72×(ΔA+0.0054)
T：反应时间，1h=1/24d； V反总：反应体系总体积：3×10-4 L；W：样本质量，0.02g。mol/mg prot
